Question

高中生物实验：DNA的粗提取与鉴定

Answer 1

DNA的粗提取与鉴定知识

1.DNA的粗提取与鉴定实验原理

(1)粗提取原理：在NaCl溶液浓度低于0.14mol/L时，DNA的溶解度随NaCl溶液浓度的增加而降低;在0.14mol/L时，DNA的溶解度最小;当NaCl溶液浓度继续增加时，DNA溶解度又增大。

(2)纯化原理：DNA不溶于酒精，但细胞中的某些蛋白质溶于酒精。

(3)鉴定DNA原理：在沸水浴条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色。

2.实验材料的选择及处理

(1)不选择猪血等哺乳动物的血液，因为哺乳动物成熟的红细胞无细胞核。

(2)需要在鸡血中加入抗凝剂——柠檬酸钠溶液，防止血液凝固。

(3)需除去鸡血中的血浆，因为血浆中无DNA。

特别提醒：不同生物的组织中DNA含量不同在选取材料时，应本着DNA含量高、材料易得、便于提取的原则。

3.生物实验过程

步骤：提取细胞核物质→溶解核内DNA→析出DNA粘稠物→滤取含DNA的粘稠物→DN A粘稠物的再溶解→过滤含有DNA的氯化钠溶液→提取含杂质较少的DNA→DNA的鉴定。

操作要点：(1)2次加蒸馏水：第一次是在是为了使血细胞吸水膨胀破裂，加水后必须充分搅拌使血细胞充分破裂;第二次加蒸馏水是为了稀释氯化钠溶液。

(2)3次加氯化钠溶液：第一次加氯化钠后，必须充分晃动烧杯，使二者混合均匀，加速染色质中DNA与蛋白质分离，使DNA充分游离并溶解在氯化钠溶液中;第二次加氯化钠溶液也是为了DNA的再溶解，这时溶液中的蛋白质含量已很少;第三次加氯化钠溶液还是为溶解DNA。

(3)6次搅拌：除最后一次搅拌外前5次搅拌均朝一个方向:，并且在析出DNA、DNA再溶解和提取中，各步搅拌都要轻缓玻璃棒，不要直插烧杯底部防止DNA分子断裂。

(4)3次过滤：第一次过滤，留滤液;第二次过滤，留粘稠物;第三次过滤，留滤液。注意这3次过滤都用纱布，获得沉淀物或粘稠物的通常为多层，获得滤液的纱布层数适当减少。

特别提醒：若以植物为实验材料，步骤上大致相同，在材料的处理上有几点不同：一是增加研磨步骤，目的是破坏细胞壁;二是加入洗涤剂，目的是溶解细胞膜及核膜;三是加食盐，可加速细胞膜及核膜的破裂。

4.DNA的粗提取与鉴定实验注意事项

(1)用冷酒精浓缩和沉淀DNA时所用的95%酒精，必须经过充分预冷后才能使用，冷酒精与含 DNA的氯化钠溶液体积比是2：1 。如果用冷酒精处理后，悬浮于溶液中的丝状物较少，可将混合液放于冰箱中再冷却几分钟，然后再用玻璃棒卷起丝状物。

(2)鸡血细胞破碎以后释放的DNA，容易被玻璃容器吸附，由于细胞内DNA的含量本来就比较少，再被玻璃容器吸附去一部分，提取到的DNA就会更少。因此，实验过程中最好使用塑料的烧杯和试管，这样可以减少提取过程中DNA的损失。