在实验基因组DNA的分离纯化中如何保证DNA的完整性

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1、核酸样品中不应存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子;

2、其他生物大分子如蛋白质、多糖和脂类分子的污染应降低到最低程度;

3、其他核酸分子,如RNA,也应尽量去除;

RNA 的去除,首先是使用 RNase 消化。在溶液 I 中加入高浓度的 RNase A ,或者用含 25ug RNase A/ml TE 溶解抽提好的质粒,都可以降低 RNA 残留,但都不能彻底去除。如果想彻底去除 RNA 残留,可以用试剂盒,或者使用对 4 个碱基都作用的 RNase。

4、洗脱时60℃温育(Ellution Buffer)洗脱缓冲液或去离子水效果更好。

扩展资料

DNA检测方法:

1、溴乙锭染色

在254nm紫外光下检测,如需回收最好在300nm紫外光下割胶。

2、银染法

银离子与DNA形成复合物,在甲醛还原下可染成黑褐色,灵敏度高200倍,但不能回收。

通常与已知分子量的标准DNA片段一起电泳,经比较可获知DNA标本大小。如条带拖尾,系加入DNA量太多或凝胶未制好。若DNA分子量小或一片模糊,表明DNA有降解。

参考资料来源

百度百科-质粒抽提

百度百科-质粒DNA纯化

百度百科-dna提取

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Sigma-Aldrich
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