Question

蛋白质测定的方法

Answer 1

蛋白质测定的方法有凯氏定氮法、双缩脲法、酚试剂法、紫外吸收法等。

一、凯氏定氮法。

1、凯氏定氮法是测定化合物或混合物中总氮量的一种方法。

2、即在有催化剂的条件下，用浓硫酸消化样品将有机氮都转变成无机铵盐。

3、然后在碱性条件下将铵盐转化为氨，随水蒸气蒸馏出来并为过量的硼酸液吸收，再以标准盐酸滴定，就可计算出样品中的氮量。

二、双缩脲法。

1、双缩脲法是一个用于鉴定蛋白质的分析方法。

2、双缩脲试剂是一个碱性的含铜试液，呈蓝色，由1%氢氧化钾、几滴1%硫酸铜和酒石酸钾钠配制。

三、酚试剂法。

1、取6支试管分别标号，前5支试管分别加入不同浓度的标准蛋白溶液，最后一支试管加待测蛋白质溶液，不加标准蛋白溶液。

2、在室温下放置30分钟，以未加蛋白质溶液的第一支试管作为空白对照，于650nm波长处测定各管中溶液的吸光度值。

四、紫外吸收法。

1、大多数蛋白质在280nm波长处有特征的最大吸收，这是由于蛋白质中有酪氨酸，色氨酸和苯丙氨酸存在，可用于测定0.1至0.5mg/mL含量的蛋白质溶液。

2、取9支试管分别标号，前8支试管分别加入不同浓度的标准蛋白溶液，1号试管不加标准蛋白溶液，最后一支试管加待测蛋白质溶液，而不加标准蛋白溶液。

3、每支试管液体总量通过加入蒸馏水补足而保持一致，将液体混合均匀，在280nm波长处进行比色，记录吸光度值。