Question

豇豆花叶病毒病有哪些病毒提纯的方法？

Answer 1

病毒接种在豇豆上并没尘在30℃下繁殖，可以在提纯中获得2g/kg叶片组织的病毒提纯物。采集病叶后，以病叶重量两倍的用量加入0.1mol/L的磷酸缓冲液（pH7.0）进行研磨。汁液过滤后经15000r/min离心20min。保留上清液，将沉淀物用磷酸缓冲液悬浮洗冲察岁涤（用量为0.25mL/g叶片组织）一次，然后经15000r/min离心。将两次获得的上清液混合，加入0.7倍散睁体积的以1∶1混合的氯仿-正丁醇搅拌1min。低速离心，除去水相，加入聚乙二醇（PEG6000）至4%浓度和NaCl至0.2mol/L沉淀病毒，在室温下搅动60min。15000r/min离心15min后，取沉淀溶于磷酸缓冲液（0.5mL/g叶片组织）。27000r/min离心15min，保留含有病毒的上清液，将沉淀物溶于少量磷酸缓冲液中，并再经27000r/min离心15min，将两次获得的上清液混合，并加在放在离心管内的1mL的40%（W/V）蔗糖溶液（用0.1mol/L磷酸缓冲液配制）上部。150000r/min离心2.5h。将病毒沉淀物溶于无菌的重蒸水中，在10000r/min离心15min以除去污染，最终获得提纯病毒粒子。