Question

基因工程 目的基因的检测与鉴定,抗原抗体杂交是怎么回事

Answer 1

目的基因导入受细胞后,是否可以稳定维持和表达其遗传特性,只通过检测与鉴定才能知道.在检测与鉴定时我认为有以下五种检测鉴定：
1、 检测受体细胞中的标记基因是否表达,即是否表现出标记基因的性状,从而判断受体细胞中是否已导入含有目的基因的运载体.如果检测出标记基因表达的性状,说明运载体已导入受体细胞.
2、 检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了目的基因,这是目的基因能否在真核生物中稳定遗传的关键.
检测方法是：采用DNA分子杂交技术.先将转基因生物的基因组提取出来；把目的基因的DNA片段用放射性同位素作标记做成探针；使探针与基因组DNA杂交,如果出现杂交带,就表明目的基因已插入染色体DNA中.
3、 检测目的基因是否转录出了mRNA,这是检测目的基因是否发挥功能作用的第一步.采用DNA与RNA分子杂交技术.从转基因生物中提取出mRNA,把目的基因的DNA片段用放射性同位素作标记做成探针；使探针与mRNA杂交,如果出现杂交带,就表明目的基因转录出了mRNA.
4、 检测目的基因是否翻译成蛋白质.从转基因生物中提取蛋白质,用相应的抗体（对抗进行同位素标记）进行抗原——抗体杂交；如果出现杂交带,表明目的基因已形成蛋白质产品.
5、 个体生物学水平的鉴定.如：一个抗虫或抗病的目的基因导入植物细胞后,是否具有了抗虫或抗病特性,需要做抗虫或抗病的接种实验,观察害虫的存活情况或植物的患病情况以确定是否具有抗性及抗性的程度.又如：有的基因工程产品需要与天然产品的功能进行活性比较,以确定转基因产品的功能中否与天然产品相同,甚至超过天然产品.
抗原抗体杂交利用抗体特异性
Western杂交——蛋白质分子（抗原—抗体）之间的杂交.它是检测目的基因是否表达出蛋白质的一种方法.
具体做法是：
第一步,将目的基因在大肠杆菌中表达出蛋白质；
第二步,将表达出的蛋白质注射动物进行免疫,产生相应的抗体,并提取出抗体（一抗）；
第三步,从转基因生物中提取蛋白质,走凝胶电泳；
第四步,将凝胶中的蛋白转移到硝酸纤维素膜上；
第五步,将抗体（一抗）与硝酸纤维素膜上的蛋白杂交,这时抗体（一抗）与目的基因表达的蛋白（抗原）会特异结合.
由于这种抗原—抗体的结合显示不出条带,所以加入一种称为二抗的抗体,它可以与一抗结合,二抗抗体上带有特殊的标记.如果目的基因表达出了蛋白质,则结果为阳性.