在现代医学中，肝炎病毒、感冒病毒、疱疹病毒这三大类病毒， 5
快一点，明天就要交了，生物作业，七年级，题目完整点是：在现代医学中，肝炎病毒、感冒病毒、疱疹病毒这三大类病毒，以及爱滋病病毒“SARS”病毒等，目前还缺乏能杀灭它们的特效...
快一点，明天就要交了，生物作业，七年级，题目完整点是：在现代医学中，肝炎病毒、感冒病毒、疱疹病毒这三大类病毒，以及爱滋病病毒“SARS”病毒等，目前还缺乏能杀灭它们的特效药物。请你查阅书籍、报刊、杂志或上网查询，了解人类对其中的一种病毒的研究情况，并写出调查报告
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面对SARS 学会微笑
世界卫生组织确认SARS病毒
世界卫生组织宣布，正式确认冠状病毒的一个变种是引起非典型肺炎的病原体。科学家们说，变种冠状病毒与流感病毒有亲缘关系，但它非常独特，以前从未在人类身上发现，科学家将其命名为"SARS病毒"（SARS是"非典"学名的英文缩写）。1965年，医学专家用人胚气管培养方法，从普通感冒病人鼻洗液中分离出一株病毒，命名为B814病毒。随后，Hamre等用人胚肾细胞分离到类似病毒，代表株命名为229E病毒。1967年，Mclntosh等用人胚气管培养从感冒病人中分离到一批病毒，其代表株是OC43株。1968年，Almeida等对这些病毒进行了形态学研究，电子显微镜观察发现，这些病毒的包膜上有形状类似日冕的棘突，故提出命名这类病毒这冠状病毒。香港卫生专家排除了它与甲型流感和乙型流感病毒有关的可能性，与1997年出现的H5N1禽流感病毒也没有联系。国家曾于1975年正式命名了冠状病毒科。据香港卫生官员说，非典型肺炎通常由病毒引起，例如流感病毒、腺病毒和其他呼吸道病毒。非典型肺炎也可能由生物体引起。冠状病毒感染在全世界非常普遍，人群中普遍冠状病毒抗体，成年人高于儿童。各国报道的人群抗体阳性率不同，我国人群以往冠状病毒抗体阳性率在30%至60%，前苏联的抗体阳性率则在53%至97%。
1937年，冠状病毒（Coronaviruses）首先从鸡身上分离出来。1965年，分离出第一株人的冠状病毒。由于在电子显微镜下可观察到其外膜上有明显的棒状粒子突起，使其形态看上去像中世纪欧洲帝王的皇冠，因此命名为“冠状病毒”。
1975年，病毒命名委员会正式命名了冠状病毒科。根据病毒的血清学特点和核苷酸序列的差异，目前冠状病毒科分为冠状病毒和环曲病毒两个属。冠状病毒科的代表株为禽传染性支气管炎病毒（Avian infectious bronchitis virus, IBV）。
在2002年冬到2003年春肆虐全球的严重急性呼吸综合征（Severe Acute Respiratory Syndrome，SARS，传染性非典型肺炎）就是冠状病毒科，冠状病毒属中的一种。
[编辑本段]形态结构
冠状病毒粒子呈不规则形状，直径约60-220nm。病毒粒子外包着脂肪膜，膜表面有三种糖蛋白：刺突糖蛋白（S，Spike Protein，是受体结合位点、溶细胞作用和主要抗原位点）；小包膜糖蛋白（E，Envelope Protein，较小，与包膜结合的蛋白）；膜糖蛋白（M，Membrane Protein，负责营养物质的跨膜运输、新生病毒出芽释放与病毒外包膜的形成）。少数种类还有血凝素糖蛋白（HE蛋白，Haemaglutinin－esterase）。冠状病毒的核酸为非节段单链（＋）RNA，长27-31kd，是RNA病毒中最长的RNA核酸链，具有正链RNA特有的重要结构特征：即RNA链5’端有甲基化“帽子”，3’端有PolyA “尾巴”结构。这一结构与真核mRNA非常相似，也是其基因组RNA自身可以发挥翻译模板作用的重要结构基础，而省去了RNA－DNA－RNA的转录过程。冠状病毒的RNA和RNA之间重组率非常高，病毒出现变异正是由于这种高重组率。重组后，RNA序列发生了变化，由此核酸编码的氨基酸序列也变了，氨基酸构成的蛋白质随之发生变化，使其抗原性发生了变化。而抗原性发生变化的结果是导致原有疫苗失效，免疫失败。
冠状病毒成熟粒子中，并不存在RNA病毒复制所需的RNA聚合酶（Viral RNA polymerase），它进入宿主细胞后，直接以病毒基因组RNA为翻译模板，表达出病毒RNA聚合酶。再利用这个酶完成负链亚基因组RNA（sub-genomic RNA）的转录合成、各种结构蛋白mRNA的合成，以及病毒基因组RNA的复制。冠状病毒各个结构蛋白成熟的mRNA合成，不存在转录后的修饰剪切过程，而是直接通过RNA聚合酶和一些转录因子，以一种“不连续转录”（discontinuous transcription）的机制，通过识别特定的转录调控序列（transcription regulating sequences, TSR），有选择性的从负义链RNA上，一次性转录得到构成一个成熟mRNA的全部组成部分。结构蛋白和基因组RNA复制完成后，将在宿主细胞内质网处装配（assembly）生成新的冠状病毒颗粒，并通过高尔基体分泌至细胞外，完成其生命周期。
[编辑本段]冠状病毒的流行病学
冠状病毒感染在世界各地极为普遍。
到目前为止，大约有15种不同冠状病毒株被发现，能够感染多种哺乳动物和鸟类，有些可使人发病。
冠状病毒引起的人类疾病主要是呼吸系统感染（包括严重急性呼吸综合征，SARS）。该病毒对温度很敏感，在33℃时生长良好，但35℃就使之受到抑制。由于这个特性，冬季和早春是该病毒疾病的流行季节。冠状病毒是成人普通感冒的主要病原之一，儿童感染率较高，主要是上呼吸道感染，一般很少波及下呼吸道。另外，还可引起婴儿和新生儿急性肠胃炎，主要症状是水样大便、发热、呕吐，每天可拉10余次，严重者甚至出现血水样便，极少数情况下也引起神经系统综合征。
病毒的生长多位于上皮细胞内，也可以感染肝脏、肾、心脏和眼睛，在另外的一些细胞类型（例如巨噬细胞）中也能生长。目前人类冠状病毒还没有合适的可作研究用的动物模型（人类疾病的动物模型（animal model of human disease）是指各种医学科学研究中建立的具有人类疾病模拟表现的动物。动物疾病模型主要用于实验生理学、实验病理学和实验治疗学（包括新药筛选）研究），因此对冠状病毒的分离工作难度很大，需用人肝脏细胞、气管及鼻黏膜细胞，经器官培养才能分离得到。增殖病毒也要用上述材料，亦很困难。
冠状病毒的血清型和抗原变异性还不明确。冠状病毒可以发生重复感染，表明其存在有多种血清型（至少有4种已知）并有抗原的变异，其免疫较困难，目前尚无特异的预防和治疗药物。
[编辑本段]传播途径及预防措施
冠状病毒通过呼吸道分泌物排出体外，经口液、喷嚏、接触传染，并通过空气飞沫传播，感染高峰在秋冬和早春。病毒对热敏感，紫外线、来苏水、0.1%过氧乙酸及1%克辽林等都可在短时间内将病毒杀死。
对其预防有特异性预防，即针对性预防措施（疫苗，疫苗的研制是有可能的，但需要时间较长，解决病毒繁殖问题是其难题）和非特异性预防措施（即预防春季呼吸道传染疾病的措施，如保暖、洗手、通风、勿过度疲劳及勿接触病人，少去人多的公共场所等）。
【摘要】 目的：阐述SARS患者病程与血清中SARS病毒含量间的关系. 方法：采用高灵敏度荧光实时定量RTPCR方法，对156份SARS患者进行检测，同时，以9.4×109 copies/L（Robert Koch Institute）灭活的SARS冠状病毒为定量标准品，病毒样颗粒为阳性对照，分析SARSCoV阳性血清样本中的病毒含量. 结果：检测试剂的灵敏度达1×105 copise/L，与相关病原体没有交叉. 81份血清样本中病毒含量分布在1×105～1×107 copies/L之间，患者血清样本中病毒含量较低，经统计学分析，病毒含量与病程长短无明显数量关系. 结论：SARS患者血清中病毒含量低，与病程没有明显的相关性.
【关键词】 SARS病毒；逆转录聚合酶链反应；定量分析；血清
0引言
冠状病毒严重急性呼吸综合征（severe acute respiratory syndrome，SARS）〔1〕，主要通过近距离密切接触传播. 从各种样本中检测SARSCoV非常重要，不仅能更好地治疗，而且能早期有效地控制疾病传播. 采用定量RTPCR方法对患者痰液、漱口液、咽拭子和粪便中SARSCoV RNA进行检测，证明了这些样本中病毒含量很高，具有传染性〔2,3〕. 而患者血液样本中阳性检出非常少. 20030516 WHO报道血液样本中有SARSCoV存在，提示人们SARS病毒可能存在病毒血症. Ng等〔4〕报道了以血清/浆检测SARSCoV是早期检测的重要手段. 我们通过对156份来自于临床患者的血清样本进行检测、定量分析，探讨不同病程与血清中SARS病毒含量间的关系，为进一步研究SARS血症提供依据.
1材料和方法
1.1材料
标准品由德国柏林Robert Koch Institute的Matthias Niedrig先生惠赠，灭活病毒含量为9.4×109 copies/L；抗核酸酶SARS病毒样核蛋白颗粒悬浮液（本实验室自制）〔5〕，浓度为1.8×1013 copies/L. SARS荧光PCR定量检测试剂盒由华美生物工程公司提供. SARS患者血清156份来自于小汤山、北京地坛等医院的-70℃储存的样本，临床诊断符合卫生部标准. 甲肝、乙肝、丙肝、戊肝、庚肝，TTV，HIV,巨细胞病毒、单纯疱疹病毒、沙眼衣原体、肺炎支原体阳性标本和正常人血清、人基因组DNA来源于华美生物工程公司PCR室. 使用美国PE公司的PE7700荧光扩增仪. SARS荧光定量PCR试剂盒由华美生物工程公司生产. 荧光PCR检测的靶序列选择在病毒RNA聚合酶基因上，该区域极为保守〔6〕. 使用的PCR引物和探针分别为SARSUP：5′cgcaagtattaagtgagatggtc3′；SARSLP 5′aagcagttgta gcatcaccg3′. 荧光探针： 5′FAMgcggctcactata tgttaaaccaggtggaaTAMRA3′.
1.2方法
血清样本的处理、RNA反转录、荧光PCR检测和结果判读均按照试剂盒说明书进行操作. 采用试剂盒中提供的5×105，5×106，5×107和5×108 copies/L的血清稀释病毒样颗粒构建标准曲线. 阴性对照为正常人血清，以正常人血清稀释的抗核酸酶SARS病毒样核蛋白颗粒悬浮液为阳性对照. 为了确认定量的精确程度，检测WHO建议的灭活SARS冠状病毒标准参考品样品. 该样品起始浓度为9.4×109 copies/L，用正常人血清进行10倍稀释，以各个稀释度为样本，通过定量试剂盒构建的标准曲线进行定量检测，并重复3次.表1SARS患者5例血清病毒含量变化（略）
2结果
2.1灵敏度和特异性将5×107 copies/L血清标准样品稀释到1×105，5×104 copies/L，并以此为样本用荧光定量试剂盒重复检测50次，其检测的Ct值分别为31.247，32.685，阳性检出率分别为100％，80％. 因此试剂盒分析灵敏度为1×105 copies/L. 以肝炎甲、乙、丙、戊、庚以及TTV，HIV，巨细胞病毒、单纯疱疹病毒、沙眼衣原体，肺炎支原体阳性标本、正常人血清和人基因组DNA为模板进行PCR检测，其Ct值均为40，结果应判为阴性，特异性良好.
2.2PCR定量标准曲线以试剂盒中提供的5×105，5×106，5×107及5×108 copies/L血清样本为标样，经过两次重复的全过程PCR反应和荧光检测，Ct值分别为28.457，25.124，22.208和18.607，获得了反应的动力学曲线（Fig 1），其中阳性对照和阴性对照的Ct值分别为24.200和40.00，检测结果极具重现性. 由于模板的Ct值与该模板起始拷贝数的对数是线性关系〔3〕，拷贝数与Ct值成反比. 根据PCR检测的Ct值和标样的模板起始拷贝数，由计算机软件做标准曲线，其中横坐标代表每个样本起始拷贝数的对数，纵坐标代表Ct值（Fig 2）. 其中标准曲线的斜率为-3.266，相关系数1.0. 因此，只要获得待检样品的Ct值，即可从标准曲线上计算出该样品的起始拷贝数. 将WHO建议的灭活SARS冠状病毒标准品用正常人血清稀释成不同浓度，用定量试剂盒构建的定量曲线进行定量分析，统计分析显示实际测定的浓度与稀释后理论数值间相关系数（Correl）为0.998，表明定量体系准确.
2.3血清样本的定量检测将156份非典患者血清样本、正常人血清（阴性对照）和阳性对照，在PE7700扩增仪上进行了荧光定量检测，结果81例为阳性，阳性率51.9％. 并根据其标准曲线、Ct值，给出每个PCR阳性样品的起始病毒含量.
由81例SARS阳性样本的研究表明，SARS病毒在血清中出现的时间，随着个体差异而不同，最短出现的病程是3 d，最长的病程达到158 d仍然有病毒存在. 所有阳性的血清标本的SARS病毒含量均在1×105～1×107 copies/L（Tab 1），病毒含量与病程的长短并没有明显的数量关系（相关性分析Correl=-0.22758）. 在检测标本中对7，4，30，3，11号血清样本进行追检，收集了不同病程的样本，经检测有3例患者血液中SARS病毒先为阳性，后转为阴性，患者病情好转. 2例患者血液中SARS病毒先为阴性，后转为阳性（Tab 1）.
3讨论
由于SARS的特殊性，需要对患者进行早期诊断，因此，对于SARSCoV的检测试剂盒灵敏度显得非常重要. 我们为了检验试剂盒的灵敏度，我们将定量的标准品稀释到5×104 copies/L，阳性检出率为80％，1×105 copies/L时，阳性检出率为100％. 说明试剂盒在临床检测中，当病毒含量在5×104～1×105 copies/L是检测的灰区，需要重复检测方可确认. 另外，用多种病原体核酸和人基因组核酸及正常人血清进一步验证了试剂盒的特异性. 事实上，该试剂盒检测的靶序列选在SARS多聚酶基因的15330～15
416(BJ01,AY 278488) 保守区，并对引物、探针和整个系统进行全面优化，从而达到高灵敏度和特异性，给SARS回顾性研究提供了有力工具.
从研究结果可知，81例血清阳性样本的病毒滴度范围在1×105～1×107 copies/L，和杨洁等〔7〕报道的痰液样本中高病毒含量（1×1011 copies/L）相差甚远，预示SARS冠状病毒可能与呼吸道疾病有关. 至于病毒血症较长的原因，有待进一步研究.
通过对5例有不同时期抽血的患者标本检测，有3例患者血液中SARS病毒先为阳性，后转为阴性，这类病例可能是由于患者住院后，随着治疗的过程，患者病情逐渐好转，血清中病毒逐渐被免疫系统清除. 2例患者血液中SARS病毒先为阴性，后转为阳性，而SARS抗体检测表现出同样的模式，是否存在临床早期诊断误判或住院后感染？为何会出现这种血清模式尚有待进一步的研究. SARS病毒在血清中存在，说明了血液具有传染性，因此，从事SARS患者血液操作要严加防护，曾患有SARS或近期曾接触SARS患者，避免义务献血，这些措施可有效地阻断SARS的传播. 另外，在研究结果中，血清中病毒存在的时间从发病后3 d到发病后158 d，证实了SARS病毒的血症期很长，提示人们在SARS检测、治疗和预防中，应该引起足够重视.
世界卫生组织确认SARS病毒
世界卫生组织宣布，正式确认冠状病毒的一个变种是引起非典型肺炎的病原体。科学家们说，变种冠状病毒与流感病毒有亲缘关系，但它非常独特，以前从未在人类身上发现，科学家将其命名为"SARS病毒"（SARS是"非典"学名的英文缩写）。1965年，医学专家用人胚气管培养方法，从普通感冒病人鼻洗液中分离出一株病毒，命名为B814病毒。随后，Hamre等用人胚肾细胞分离到类似病毒，代表株命名为229E病毒。1967年，Mclntosh等用人胚气管培养从感冒病人中分离到一批病毒，其代表株是OC43株。1968年，Almeida等对这些病毒进行了形态学研究，电子显微镜观察发现，这些病毒的包膜上有形状类似日冕的棘突，故提出命名这类病毒这冠状病毒。香港卫生专家排除了它与甲型流感和乙型流感病毒有关的可能性，与1997年出现的H5N1禽流感病毒也没有联系。国家曾于1975年正式命名了冠状病毒科。据香港卫生官员说，非典型肺炎通常由病毒引起，例如流感病毒、腺病毒和其他呼吸道病毒。非典型肺炎也可能由生物体引起。冠状病毒感染在全世界非常普遍，人群中普遍冠状病毒抗体，成年人高于儿童。各国报道的人群抗体阳性率不同，我国人群以往冠状病毒抗体阳性率在30%至60%，前苏联的抗体阳性率则在53%至97%。
1937年，冠状病毒（Coronaviruses）首先从鸡身上分离出来。1965年，分离出第一株人的冠状病毒。由于在电子显微镜下可观察到其外膜上有明显的棒状粒子突起，使其形态看上去像中世纪欧洲帝王的皇冠，因此命名为“冠状病毒”。
1975年，病毒命名委员会正式命名了冠状病毒科。根据病毒的血清学特点和核苷酸序列的差异，目前冠状病毒科分为冠状病毒和环曲病毒两个属。冠状病毒科的代表株为禽传染性支气管炎病毒（Avian infectious bronchitis virus, IBV）。
在2002年冬到2003年春肆虐全球的严重急性呼吸综合征（Severe Acute Respiratory Syndrome，SARS，传染性非典型肺炎）就是冠状病毒科，冠状病毒属中的一种。
[编辑本段]形态结构
冠状病毒粒子呈不规则形状，直径约60-220nm。病毒粒子外包着脂肪膜，膜表面有三种糖蛋白：刺突糖蛋白（S，Spike Protein，是受体结合位点、溶细胞作用和主要抗原位点）；小包膜糖蛋白（E，Envelope Protein，较小，与包膜结合的蛋白）；膜糖蛋白（M，Membrane Protein，负责营养物质的跨膜运输、新生病毒出芽释放与病毒外包膜的形成）。少数种类还有血凝素糖蛋白（HE蛋白，Haemaglutinin－esterase）。冠状病毒的核酸为非节段单链（＋）RNA，长27-31kd，是RNA病毒中最长的RNA核酸链，具有正链RNA特有的重要结构特征：即RNA链5’端有甲基化“帽子”，3’端有PolyA “尾巴”结构。这一结构与真核mRNA非常相似，也是其基因组RNA自身可以发挥翻译模板作用的重要结构基础，而省去了RNA－DNA－RNA的转录过程。冠状病毒的RNA和RNA之间重组率非常高，病毒出现变异正是由于这种高重组率。重组后，RNA序列发生了变化，由此核酸编码的氨基酸序列也变了，氨基酸构成的蛋白质随之发生变化，使其抗原性发生了变化。而抗原性发生变化的结果是导致原有疫苗失效，免疫失败。
冠状病毒成熟粒子中，并不存在RNA病毒复制所需的RNA聚合酶（Viral RNA polymerase），它进入宿主细胞后，直接以病毒基因组RNA为翻译模板，表达出病毒RNA聚合酶。再利用这个酶完成负链亚基因组RNA（sub-genomic RNA）的转录合成、各种结构蛋白mRNA的合成，以及病毒基因组RNA的复制。冠状病毒各个结构蛋白成熟的mRNA合成，不存在转录后的修饰剪切过程，而是直接通过RNA聚合酶和一些转录因子，以一种“不连续转录”（discontinuous transcription）的机制，通过识别特定的转录调控序列（transcription regulating sequences, TSR），有选择性的从负义链RNA上，一次性转录得到构成一个成熟mRNA的全部组成部分。结构蛋白和基因组RNA复制完成后，将在宿主细胞内质网处装配（assembly）生成新的冠状病毒颗粒，并通过高尔基体分泌至细胞外，完成其生命周期。
[编辑本段]冠状病毒的流行病学
冠状病毒感染在世界各地极为普遍。
到目前为止，大约有15种不同冠状病毒株被发现，能够感染多种哺乳动物和鸟类，有些可使人发病。
冠状病毒引起的人类疾病主要是呼吸系统感染（包括严重急性呼吸综合征，SARS）。该病毒对温度很敏感，在33℃时生长良好，但35℃就使之受到抑制。由于这个特性，冬季和早春是该病毒疾病的流行季节。冠状病毒是成人普通感冒的主要病原之一，儿童感染率较高，主要是上呼吸道感染，一般很少波及下呼吸道。另外，还可引起婴儿和新生儿急性肠胃炎，主要症状是水样大便、发热、呕吐，每天可拉10余次，严重者甚至出现血水样便，极少数情况下也引起神经系统综合征。
病毒的生长多位于上皮细胞内，也可以感染肝脏、肾、心脏和眼睛，在另外的一些细胞类型（例如巨噬细胞）中也能生长。目前人类冠状病毒还没有合适的可作研究用的动物模型（人类疾病的动物模型（animal model of human disease）是指各种医学科学研究中建立的具有人类疾病模拟表现的动物。动物疾病模型主要用于实验生理学、实验病理学和实验治疗学（包括新药筛选）研究），因此对冠状病毒的分离工作难度很大，需用人肝脏细胞、气管及鼻黏膜细胞，经器官培养才能分离得到。增殖病毒也要用上述材料，亦很困难。
冠状病毒的血清型和抗原变异性还不明确。冠状病毒可以发生重复感染，表明其存在有多种血清型（至少有4种已知）并有抗原的变异，其免疫较困难，目前尚无特异的预防和治疗药物。
[编辑本段]传播途径及预防措施
冠状病毒通过呼吸道分泌物排出体外，经口液、喷嚏、接触传染，并通过空气飞沫传播，感染高峰在秋冬和早春。病毒对热敏感，紫外线、来苏水、0.1%过氧乙酸及1%克辽林等都可在短时间内将病毒杀死。
对其预防有特异性预防，即针对性预防措施（疫苗，疫苗的研制是有可能的，但需要时间较长，解决病毒繁殖问题是其难题）和非特异性预防措施（即预防春季呼吸道传染疾病的措施，如保暖、洗手、通风、勿过度疲劳及勿接触病人，少去人多的公共场所等）。
【摘要】 目的：阐述SARS患者病程与血清中SARS病毒含量间的关系. 方法：采用高灵敏度荧光实时定量RTPCR方法，对156份SARS患者进行检测，同时，以9.4×109 copies/L（Robert Koch Institute）灭活的SARS冠状病毒为定量标准品，病毒样颗粒为阳性对照，分析SARSCoV阳性血清样本中的病毒含量. 结果：检测试剂的灵敏度达1×105 copise/L，与相关病原体没有交叉. 81份血清样本中病毒含量分布在1×105～1×107 copies/L之间，患者血清样本中病毒含量较低，经统计学分析，病毒含量与病程长短无明显数量关系. 结论：SARS患者血清中病毒含量低，与病程没有明显的相关性.
【关键词】 SARS病毒；逆转录聚合酶链反应；定量分析；血清
0引言
冠状病毒严重急性呼吸综合征（severe acute respiratory syndrome，SARS）〔1〕，主要通过近距离密切接触传播. 从各种样本中检测SARSCoV非常重要，不仅能更好地治疗，而且能早期有效地控制疾病传播. 采用定量RTPCR方法对患者痰液、漱口液、咽拭子和粪便中SARSCoV RNA进行检测，证明了这些样本中病毒含量很高，具有传染性〔2,3〕. 而患者血液样本中阳性检出非常少. 20030516 WHO报道血液样本中有SARSCoV存在，提示人们SARS病毒可能存在病毒血症. Ng等〔4〕报道了以血清/浆检测SARSCoV是早期检测的重要手段. 我们通过对156份来自于临床患者的血清样本进行检测、定量分析，探讨不同病程与血清中SARS病毒含量间的关系，为进一步研究SARS血症提供依据.
1材料和方法
1.1材料
标准品由德国柏林Robert Koch Institute的Matthias Niedrig先生惠赠，灭活病毒含量为9.4×109 copies/L；抗核酸酶SARS病毒样核蛋白颗粒悬浮液（本实验室自制）〔5〕，浓度为1.8×1013 copies/L. SARS荧光PCR定量检测试剂盒由华美生物工程公司提供. SARS患者血清156份来自于小汤山、北京地坛等医院的-70℃储存的样本，临床诊断符合卫生部标准. 甲肝、乙肝、丙肝、戊肝、庚肝，TTV，HIV,巨细胞病毒、单纯疱疹病毒、沙眼衣原体、肺炎支原体阳性标本和正常人血清、人基因组DNA来源于华美生物工程公司PCR室. 使用美国PE公司的PE7700荧光扩增仪. SARS荧光定量PCR试剂盒由华美生物工程公司生产. 荧光PCR检测的靶序列选择在病毒RNA聚合酶基因上，该区域极为保守〔6〕. 使用的PCR引物和探针分别为SARSUP：5′cgcaagtattaagtgagatggtc3′；SARSLP 5′aagcagttgta gcatcaccg3′. 荧光探针： 5′FAMgcggctcactata tgttaaaccaggtggaaTAMRA3′.
1.2方法
血清样本的处理、RNA反转录、荧光PCR检测和结果判读均按照试剂盒说明书进行操作. 采用试剂盒中提供的5×105，5×106，5×107和5×108 copies/L的血清稀释病毒样颗粒构建标准曲线. 阴性对照为正常人血清，以正常人血清稀释的抗核酸酶SARS病毒样核蛋白颗粒悬浮液为阳性对照. 为了确认定量的精确程度，检测WHO建议的灭活SARS冠状病毒标准参考品样品. 该样品起始浓度为9.4×109 copies/L，用正常人血清进行10倍稀释，以各个稀释度为样本，通过定量试剂盒构建的标准曲线进行定量检测，并重复3次.表1SARS患者5例血清病毒含量变化（略）
2结果
2.1灵敏度和特异性将5×107 copies/L血清标准样品稀释到1×105，5×104 copies/L，并以此为样本用荧光定量试剂盒重复检测50次，其检测的Ct值分别为31.247，32.685，阳性检出率分别为100％，80％. 因此试剂盒分析灵敏度为1×105 copies/L. 以肝炎甲、乙、丙、戊、庚以及TTV，HIV，巨细胞病毒、单纯疱疹病毒、沙眼衣原体，肺炎支原体阳性标本、正常人血清和人基因组DNA为模板进行PCR检测，其Ct值均为40，结果应判为阴性，特异性良好.
2.2PCR定量标准曲线以试剂盒中提供的5×105，5×106，5×107及5×108 copies/L血清样本为标样，经过两次重复的全过程PCR反应和荧光检测，Ct值分别为28.457，25.124，22.208和18.607，获得了反应的动力学曲线（Fig 1），其中阳性对照和阴性对照的Ct值分别为24.200和40.00，检测结果极具重现性. 由于模板的Ct值与该模板起始拷贝数的对数是线性关系〔3〕，拷贝数与Ct值成反比. 根据PCR检测的Ct值和标样的模板起始拷贝数，由计算机软件做标准曲线，其中横坐标代表每个样本起始拷贝数的对数，纵坐标代表Ct值（Fig 2）. 其中标准曲线的斜率为-3.266，相关系数1.0. 因此，只要获得待检样品的Ct值，即可从标准曲线上计算出该样品的起始拷贝数. 将WHO建议的灭活SARS冠状病毒标准品用正常人血清稀释成不同浓度，用定量试剂盒构建的定量曲线进行定量分析，统计分析显示实际测定的浓度与稀释后理论数值间相关系数（Correl）为0.998，表明定量体系准确.
2.3血清样本的定量检测将156份非典患者血清样本、正常人血清（阴性对照）和阳性对照，在PE7700扩增仪上进行了荧光定量检测，结果81例为阳性，阳性率51.9％. 并根据其标准曲线、Ct值，给出每个PCR阳性样品的起始病毒含量.
由81例SARS阳性样本的研究表明，SARS病毒在血清中出现的时间，随着个体差异而不同，最短出现的病程是3 d，最长的病程达到158 d仍然有病毒存在. 所有阳性的血清标本的SARS病毒含量均在1×105～1×107 copies/L（Tab 1），病毒含量与病程的长短并没有明显的数量关系（相关性分析Correl=-0.22758）. 在检测标本中对7，4，30，3，11号血清样本进行追检，收集了不同病程的样本，经检测有3例患者血液中SARS病毒先为阳性，后转为阴性，患者病情好转. 2例患者血液中SARS病毒先为阴性，后转为阳性（Tab 1）.
3讨论
由于SARS的特殊性，需要对患者进行早期诊断，因此，对于SARSCoV的检测试剂盒灵敏度显得非常重要. 我们为了检验试剂盒的灵敏度，我们将定量的标准品稀释到5×104 copies/L，阳性检出率为80％，1×105 copies/L时，阳性检出率为100％. 说明试剂盒在临床检测中，当病毒含量在5×104～1×105 copies/L是检测的灰区，需要重复检测方可确认. 另外，用多种病原体核酸和人基因组核酸及正常人血清进一步验证了试剂盒的特异性. 事实上，该试剂盒检测的靶序列选在SARS多聚酶基因的15330～15
416(BJ01,AY 278488) 保守区，并对引物、探针和整个系统进行全面优化，从而达到高灵敏度和特异性，给SARS回顾性研究提供了有力工具.
从研究结果可知，81例血清阳性样本的病毒滴度范围在1×105～1×107 copies/L，和杨洁等〔7〕报道的痰液样本中高病毒含量（1×1011 copies/L）相差甚远，预示SARS冠状病毒可能与呼吸道疾病有关. 至于病毒血症较长的原因，有待进一步研究.
通过对5例有不同时期抽血的患者标本检测，有3例患者血液中SARS病毒先为阳性，后转为阴性，这类病例可能是由于患者住院后，随着治疗的过程，患者病情逐渐好转，血清中病毒逐渐被免疫系统清除. 2例患者血液中SARS病毒先为阴性，后转为阳性，而SARS抗体检测表现出同样的模式，是否存在临床早期诊断误判或住院后感染？为何会出现这种血清模式尚有待进一步的研究. SARS病毒在血清中存在，说明了血液具有传染性，因此，从事SARS患者血液操作要严加防护，曾患有SARS或近期曾接触SARS患者，避免义务献血，这些措施可有效地阻断SARS的传播. 另外，在研究结果中，血清中病毒存在的时间从发病后3 d到发病后158 d，证实了SARS病毒的血症期很长，提示人们在SARS检测、治疗和预防中，应该引起足够重视.
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一,肝炎病毒,只能通过血液传播,性传播,垂直传播.而一般正常交往,如握手,拥抱.交谈,及至一同进餐等.都不会互相感染.其病毒携带者,和正常人一样,没有任何不良反应.只有,带病毒的个体,在产生免疫反应时.在清除病毒的同时,也损害宿主的肝细胞时,就会出现病态反应.
二,感冒病毒,目前所知,有五十多种血清型.平时寄居人的上呼吸道,如鼻腔,咽喉等地方,与人和平共处.当人在疲劳过度,或睡眠时受凉,或其它原因,引起抵抗力下降时,它就趁虚而入.对人发起攻击,使人致病
三,艾滋病病毒,也是通过性传播和血液传播.及垂直传播的,除此以外,一般正常交往,是不会被感染的,其病毒使患者的免疫力缺失,医学上叫获得性免疫缺失症.人一旦失去免疫力.在自然环境中,很容易得各种疾病而导致死亡,
四,非典病毒,是一种传播力极强的病毒,是亲肺型的变异新病毒,呈球状,且有较强的致死宿主的能力,但必须有足够的群体才行,所在空气流通的环境下,它没有致病能力,它怕热,当气温上升到30c时,它就消声匿迹了.
病毒对抗菌素不敏感,所以说目前尚未有杀灭它的特效药,临床经验告诉我们.许多中草药,能帮助我们战胜它.
以上不是什么调查报告和书本知识.只是本人的临床经验,难免有其局限性,仅做参考.
二,感冒病毒,目前所知,有五十多种血清型.平时寄居人的上呼吸道,如鼻腔,咽喉等地方,与人和平共处.当人在疲劳过度,或睡眠时受凉,或其它原因,引起抵抗力下降时,它就趁虚而入.对人发起攻击,使人致病
三,艾滋病病毒,也是通过性传播和血液传播.及垂直传播的,除此以外,一般正常交往,是不会被感染的,其病毒使患者的免疫力缺失,医学上叫获得性免疫缺失症.人一旦失去免疫力.在自然环境中,很容易得各种疾病而导致死亡,
四,非典病毒,是一种传播力极强的病毒,是亲肺型的变异新病毒,呈球状,且有较强的致死宿主的能力,但必须有足够的群体才行,所在空气流通的环境下,它没有致病能力,它怕热,当气温上升到30c时,它就消声匿迹了.
病毒对抗菌素不敏感,所以说目前尚未有杀灭它的特效药,临床经验告诉我们.许多中草药,能帮助我们战胜它.
以上不是什么调查报告和书本知识.只是本人的临床经验,难免有其局限性,仅做参考.
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