Question

Trizol提取RNA

用Trizol试剂盒抽提鱼肝脏RNA时，加入氯仿离心取出的上清加入异丙醇后，会出现大量絮状白色物质，离心后有大量沉淀，OD260/OD280约为1.5，估计沉淀中存在大量蛋白质，但为什么会出现此现象呢?同样的试剂和操作提取脾脏则无此现象，请高手指点

Answer 1

造成OD260/OD280偏低有两种情况：

1.DNA 污染
鱼类肝脏的DNA含量比较多。像你提到的加入异丙醇后又大量的白色絮状沉淀出现，极有可能是DNA没有去除干净。
造成DNA污染的原因主要是Trizol加入氯仿时混匀力度不够，造成DNA未被完全萃取。建议氯仿和trizol混匀时加大震荡力度。

2.蛋白质污染
吸取上清时吸取的上清过多，中间层的蛋白质。造成最后的蛋白质污染。严重影响提取RNA的纯度。

其实现在提取RNA，建议不要用Trizol。Trizol虽然是最经典的方法，但也存在着有机抽提（毒性较大），耗时较长，对操作者要求高等缺点。现行的硅胶柱能很好的解决这个问题。市场上Qiagen， Omega的产品都不错。Qiagen的价格稍高。

Answer 2

不同组织的蛋白含量和性质都是不同的，如果有蛋白沉淀，重新用氯仿抽提一次就还是了

Answer 3

Answer 4

重复几次除蛋白的步骤。

Answer 5

材料的蛋白太多了自然提取的时候残余的蛋白也多啊。