Question

pod酶活性测定方法

Answer 1

pod酶活性测定方法有定时法、连续监测法、平衡法。

1、定时法

通过测定酶反应开始后某一时间段内（t1到t2）产物或底物浓度的总变化量来求取酶反应初速度的方法。其中t1往往取反应开始的时间。该法最基本的一点是停止反应后才测定底物或物的变化。

优点：简单易行，对试剂要求不高。

缺点：难保证测定结果的真实性。

难以确定反应时间段酶促反应是否处于线性期。随着保温时间的延续，酶变性失活加速。

2、连续监测法

又称为动力学法或速率法、连续反应法。在酶反应过程中，用仪器监测某一反应产物或底物浓度随时间的变化所发生的改变，通过计算求出酶反应初速度。连续监测法根据连续测得的数据，可选择线性期的底物或产物变化速率用于计算酶活力。因此连续监测法测定酶活性比定时法更准确。

3、平衡法

通过测定酶反应开始至反应达到平衡时产物或底物浓度总变化量来求出酶活力的方法，又叫终点法。酶活力也称酶活性，是指酶催化一定化学反应的能力。酶活力的大小可以用在一定条件下，它所催化的某一化学反应的转化速率来表示，即酶催化的转化速率越快，酶的活力就越高；反之，速率越慢，酶的活力就越低。

Answer 2

POD酶活植物样品，科米代谢使用比色法来测定
1 样品前处理
称取0.2 g样品置于预冷的研钵中，分三次加入6 ml（2 ml、2 ml、2 ml）预冷的磷酸缓冲液（pH 7.8），在冰浴上研磨成匀浆，转入10 ml离心管中，低温12000 r/min离心20min，上清夜即为酶粗提液。
2 测定方法
（1）反应混合液的配制：取100 ml磷酸缓冲液（pH 6.0）于烧杯中，加入38 μl愈创木酚（2-甲氧基酚）于磁力搅拌器上加热搅拌，直至愈创木酚溶解，待溶液冷后加入56 μl 30％的H2O2，混匀后保存于4℃备用。
（2）酶活性测定：取3 ml反应混合液，加入35 μl酶液（可视情况调整）后测定470 nm下的吸光度，10 s测定一次，测定120 s。以PBS（pH6.0）代替酶液作为对照调零。