Question

shrna真核表达载体筛选的干扰细胞可维持多久

Answer 1

有的时候在不同的表达体系里面对蛋白的表达量是有影响的。
当构建完成后携带有信号肽的时候，一些蛋白在真核表达体系中表达量极低。去除信号肽序列值后，直接表达成熟肽，表达水平明显提高。
所以说构建的真核表达载体高表达mRNA却检测不到目的蛋白是完全有可能的。

Answer 2

如何筛选在真核细胞中的阳性克BamH 1 的酶切位点在tet上，所以酶切重组后，质粒就不会再表达四环素抗性抗性了，筛选阳性克隆要挑选在Amp平板上生长的菌株，而在Tet平板上生长的菌株是插入失败的。