2．哪些环节会影响革兰氏染色结果的正确性？其中最关键的环节是什么？
影响革兰氏染色结果正确性的关键环节是用脱色剂乙醇处理，为了保证革兰氏染色结果的正确性，必须控制乙醇脱色时间，尽量采用规范的染色方法。
通常在实验中经常会出现假阳性和假阴性的结果，假阳性主要是由于脱色不完全，可能是由于涂片过厚，或者是结晶紫染色过度，导致脱色不完全。
革兰氏染色的原理：
在结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，故遇乙醇或丙酮脱色处理时，因失水反而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙，因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色。
而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈无色，再经沙黄等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色。
以上内容参考：
脱色环节脱色不足会把革兰氏阳性菌染成阴性菌，脱色过度会把阴性菌染成阳性菌。染色时间染色时间过长或过短都会影响染色结果的正确性。
影响革兰氏染色结果正确性的关键环节是用脱色剂乙醇处理，为了保证革兰氏染色结果的正确性，必须控制乙醇脱色时间，尽量采用规范的染色方法。
扩展资料：
原理：
通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，故遇乙醇或丙酮脱色处理时，因失水反而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙；
因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出；
因此通过乙醇脱色后仍呈无色，再经沙黄等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色。染色的差异主要是阴性与阳性细菌细胞壁的差异所引起的。
