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绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)
荧光是荧光蛋白最特别的特点,而其中的发色团起着主要的作用。在 α-螺旋上的 65、66、67位氨基酸—— 丝氨酸 、 酪氨酸 、 甘氨酸 经过环化、脱氢等作用后形成发色团。
GFP由238个氨基酸残基组成,分子量约27kDa。它具有β-桶的结构,几乎是个直径2.4nm,长4.2nm的完美圆柱。11个β-折叠链形成 β-筒的外周,筒两端分别被一些分子量较小的短α-螺旋覆盖,组成生色团的三个残基(Ser65-Tyr66-Gly67)与α-螺旋共价相连,位于圆筒中央螺旋中部。β-圆筒与短α-螺旋形成致密的结构域,使配体不能扩散进入,生色团被严格保 护在筒内,因此其性质稳定,不易被淬灭。GFP的生色基团由位于第65 ~ 67位的3个氨基酸: 丝氨酸 -脱水酪氨酸-甘氨酸形成的对羟基苯咪唑啉酮 ( 4-p-hydroxybene-5imidazolinone)构成 , GFP的发光现象由其生色团决定,GFP表达后折叠,在有氧条件下第66位氨基酸残基脱氢,使Ser65-Tyr66-Gly67环化形成对羟基苯咪唑啉酮,即生色团。
⑴ 作为报道基因构建基因工程载体
GFP灵敏度高,不需要其他辅助底物就能产生较强的荧光,且通过导入GFP基因在实验体内表达,对细胞无毒害, 能在转化后遗传给后代,因此是理想的报告基因。作为报告基因,通过测定GFP的荧光强度可对生物体内一个或多个基因的表达水平进行检测,目前在动植物及微生物检测基因转化效率中已有较广泛的应用。
⑵ 目的基因的功能研究
将目的基因与 gfp基因连接后,通过观测融合 蛋白的荧光特性研究其表达和功能。
Reference:
绿色荧光蛋白--结构及应用
绿色荧光蛋白及其应用
绿色荧光蛋白的结构、发光机制及其应用研究
绿色荧光蛋白在转基因研究中的应用