目的基因能否稳定遗传的关键是检测什么

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2022-09-26 · 百度认证:长春市锐途文化传媒官方账号
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目的基因能否稳定遗传的关键是检测基因表达载体的构建。显然,在实际应用中,只有那些以足够高的水平表达目的基因的转基因生物才是有意义的。

如果转基因后代分离比例不符合孟德尔遗传规律,转入的外源基因有可能干扰了内源基因的表达。另一个原因是在受体基因组中的不同位点整合了两个或更多个转基因拷贝。这些都要进行育种试验确认。

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目的基因相关的操作包括目的基因鉴定、分离、克隆、转化及转化后鉴定和测试等。

通常,目的基因要么是已知供体生物基因组“文库”的一部分,要么是来自于先前未研究过的供体生物基因组。无论是哪种情况,聚合酶链式反应(PCR)技术都可以是目的基因倍增至生成构建体所需的数百万拷贝的水平。

当产生许多拷贝的目的基因后,可以通过酶切反应(或gataway系统),将目的基因酶促连接到构建载体中,然后将整个构建在细菌中表达,从报告基因选取阳性转化体,通常涉及含有插入DNA的菌落中的一些颜色变化。挑取阳性菌落,做液体培养,提取质粒DNA,进行酶切,切胶纯合。获得的DNA可用于后续的转化。

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