Question

简述Sanger“双脱氧链终止法”进行DNA测序的基本原理。

Answer 1

【答案】：双脱氧链终止法测序的基本原理是：以待测DNA片段为模板，利用酶法合成与待测片段互补的DNA链。在正常的合成体系中，分别加入4种3'位缺少羟基的双脱氧核苷酸底物，即ddATP、ddGTP、ddCTP、ddTTP，制备出四套末端标记的DNA片段。由于ddNTPs一旦掺入合成的DNA链，其链的合成即被终止，这样得到一套长短不一的片段，而每套片段被打断的位置却位于同一碱基，4套片段分别打断在A、T、C、G处。当对这4个不同碱基产生的4套DNA片段进行变性胶电泳分离时，即可产生一个可以直接读出DNA顺序的梯状区带。