Question

在pcr实验中,引物的设计一般有哪些要求

Answer 1

洁思隆新材料（苏州）有限公司是一家专注于PCR材料再生和科研的公司，为创造更加安全、舒适、纯净，便捷的人类生活提供全新的材料解决方案的新材料企业。推动人类生活环境的持续改善，创造美好生活。

洁思隆新材料(苏州)有限公司座落在有着“上有天堂，下有苏杭”之称的苏州，它也是一座园林城市。一座有底蕴的美丽城市，一家有责任的新兴公司。我们会在这花园的城市里，萃取自己的产品，不忘初心，为青山绿水，贡献自己的一点力量!

洁思隆新材料（苏州）有限公司，已深耕塑料行业多年。近年来随着经济的发展，环境的污染成为社会的主要议题，洁思隆新材料（苏州）有限公司认为一个有社会责任感的公司要为社会碳中和贡献自己一点力量。为此公司决定致力于塑料的循环利用，再生料的溯源，化学品的使用，环境的保护，社会责任的提升，洁塑隆一直在行动。

Answer 2

引物设计原则：
长度: 18~30 bp, 20 bp左右最为常用。引物过短易导致非特异性打增；较长引物特异性强，但退火效率低，且易形成二级结构，从而导致PCR产量少。
二级结构:引物二聚体及发夹结构的能值过高(大于4.5 kcal/mol )易导致产生引物二聚体带，并且降低有效引物浓度，使PCR反应不能正常进行。
引物扩增跨度: 200-3000 bp，特定条件下可扩增至10kb的片段；而实时荧光PCR较短，为70-150 bp。
引物GC:含量40-60%为宜，太低会生成不稳定的引物-模板复合物，从而降低扩增效率，过高时解链所需能量高，难以打开。
引物的特异性:引物与非特异扩增序列的同源性不要超过70%。
碱基分布: ATCG要随机分布，避免出现重复序列，如-CCAG-CCAG-CCAG-重复序列；避免单条引物或多条引|物间互补；避免单个碱基连续重复4次以上。
熔解温度Tm :最佳为55-60 °C , 引物对之间Tm差异不超过2-3°C，如差异过大，扩增效率将大大降低。