Question

PCR产物跑胶什么条带都没有是怎么回事

DNA OD值为1.88，浓度3.4ug/uL ；跑胶检测条带清楚

Answer 1

做PCR时，最抑闷的一件事就是花了三个多小时，一点儿结果都没有。以前做的时候，我也遇到这增的问题！所有的反应液和底物加好了，机器设好了，跑吧，跑完PCR了，好的，再来跑电泳检测，结果，白花花一大片，什么都没有，那一刻，觉得自己好失败，别人的什么有，自己的什么都见不到，真想把机器给砸了。

    后来不断的调整Taq酶的浓度，当然是增加了，有了一点儿效果，但是，还是不理想，再调整（降低）底物（DNA）的浓度，还是不行，再调整（稀释到50倍），再做一次，有了，很是漂亮而又清晰的PCR产物的条带！ 那一刻，真是太高兴了！紧接着，又做了一次，所有的样品都有PCR产物了。

    总结一下，就是DNA的问题，它的浓度太高，而且在提取DNA时如果不纯，那么里的杂质就会太多，只有通过稀释DNA（同时也是稀释杂质），才能使DNA在样品里的浓度和杂质浓度的比值无限大，在这样的条件下，只要有足够的酶，那么，反应就能正常进行，得到预期的产物。因为，如果杂交的浓度过大，酶的活性就会受到抑制。

    因此，我的建议是：第一，稀释底物浓度，分两个梯度（25倍，50倍）；

                      第二，加大酶的浓度（1.5或2U）。

                      以上是在25uL反应体系下的建议

Answer 2

可能回收时DNA提取不好。建议DNA提取完了以后再去跑胶检测的，测定DNA提取的效果和浓度。然后做PCR。

Answer 3

会不会是没有扩增成功，OD显示的是单核苷酸的浓度

Answer 4

模板或者引物的问题拉

Answer 5

PCR失败了,可能是引物,PCR程序的问题.