Question

如何从小鼠骨髓中分离和培养DC

Answer 1

1、 取骨髓，对倍稀释
2、 用滴管沿管壁缓慢加入淋巴细胞分离液(45度角倾斜，尽量产生气泡，起到缓冲作用)
3、 2000转，离心30分钟
4、 吸取白膜层，（沿管壁）交替多次吸取，加入5倍体积以上的PBS液
5、 1500转，离心15分钟（洗掉血小板）
6、 弃掉上清，留少许回流液，轻弹管壁，加入PBS液至50ml
7、 800转，离心10分钟，（洗掉红细胞）
8、 重复两至三次
9、 加入PBS液至50ml，计数:？个细胞
离心后铺板，1X1076孔板培养液，共铺20板。无血清1640+DNA酶12h后轻晃培养液，洗板后加入完全培养基和GM—CSF(1000U/ml)和IL—4(500U/lml)
10、 第三天每孔补加等体积的完全培养基和GM—CSF(1000U/ml)和IL—4(500U/lml) ，这时细胞部分悬浮
11、 第五天为imDC，+1LPS(1ug/ml),诱导至第七天，为mDC。