Question

凝胶过滤层析上样体积为什么只有1-2ml，如果体积大了会有什么影响

Answer 1

凝胶过滤层析上样体积为什么只有1-2ml，如果体积大了会有什么影响
你说的洗脱体积之差是指两个组分的洗下来的体积?你这个问题第一次见,没有听说过样品体积要小于洗脱体积之差这种说法,你在哪里看到的.一般使用凝胶过滤层析,想要获得高分辨率,上样体积控制在柱床体积的0.5—4%,最好是2%,群组分离时可以达到30%,小于0.5%没有意义了.另外,目前市面上分辨率最好的柱料是GE的Superdex,手填柱子的话可以达到10K分辨率.预装柱应该更高,但是十分昂贵,没有试过.其他柱料分离的分辨率要求两种蛋白的分子量相差一倍以上,如果不满足这个条件,大多是骗人的.还有柱料的选择,缓冲液的选择和样品的处理等等很多条件都影响了凝胶层析的效果.