Question

油菜花叶病毒病的理化性质是什么？

Answer 1

病毒名称：油菜花叶病毒Youcai mosaic virus（YoMV）。

分类地位：烟草花叶病毒属Tobamovirus，未定科。

病毒的提纯：新鲜病叶于-15℃下冷冻过夜，榨汁，残渣加磷酸氢二钾浸渍2～3次，合并滤液于30～50℃中保温20min再加0.2%～0.5%正丁醇搅拌10min，离心2800r/min，30min除去沉淀，上清液加25%（pH7.2）硫酸铵，再于2800r/min，离心30min，将沉淀悬浮于0.02mol/L（pH7.2）磷酸盐缓冲液中，再加入pH4.5，0.2mol/L醋酸钠缓冲液调整酸度至pH6，然后于5000r/min，离心10min。重复进行醋酸沉淀和离心数次，最后将沉淀加少量水溶解，再用蒸馏水透析、离心除去少量寄主蛋白即可得病毒制剂。呈典型核蛋白曲线。本分离物提纯制剂电泳只出现一个峰。但如与TMV混合进行电泳则出现双峰。

病毒理化特性：

①病毒粒子：电镜观察为长300nm*18nm的棒状病毒、长短轴比约为23，极易聚集成束，分层形成纺锤体。沉降系数：192S。A260/A280为1.09，等电点：pH5.35。分子质量：38*106u。

②核酸：病毒的核酸RNA，含量为5.12%，核酸含磷量为8.8%。A260/A280为0.48，G∶A∶C∶U=23.2∶28.0∶19.9∶29.0。

③蛋白：蛋白总N量16.4%，在67%氯乙醇中，蛋白分解为亚基，其分子质量为15000～17000u，每一亚基系由一条无自由α氨基，而以苏氨酸为C端的肽链组成，形成具有直径40A的空心棒状外壳。其氨基酸组成为Cys1，Asp14，Thr10，Ser12，Glu20，Pro8，Giy3，Ala19，Vla10，Mel3，Ileu6，Leu14，Tyr7，Phe6，Lys2，His1，Arg10，Tty3，共149个氨基酸。利用Niu的方法测定油菜花叶病毒的上端五个氨基酸，结果表明分别为Ser、Gly、Pro、Ala、Thr与TMV普通株系的C端相同。

其他：油菜花叶病毒与TMV的普通株系（TMVc）具有类似的寄主范围，有交互血清反应，相似的体外抗性，相同的侵染方法，同属于烟草花叶病毒属成员。但油菜花叶病毒对TMV在烟草上的干扰作用极弱，同时接种两种病毒，在接种后2～3d油菜花叶病毒占优势，以后则TMV浓度逐渐超过油菜花叶病毒。油菜花叶病毒的等电点为pH5.35比TMV的pH3.7高，沉降系数为192S比TMV的188S高，消光系数27.2比TMV的29.1低，衣壳蛋白亚基分子质量15000u低于TMV的17500u。油菜花叶病毒-RNA在麦胚无细胞体系中对“C小球藻蛋白水解液渗入的最适浓度为270ng/ml，而TMV的最适浓度为160ng/ml。全长的TMV—RNA在体外体系中不能指导合成其衣壳蛋白。但全长的油菜花叶病毒-RNA却可翻译出衣壳蛋白。在麦胚体系中油菜花叶病毒－RNA指导合成的产物主要是油菜花叶病毒衣壳蛋白（16.5K），其次是36K、25K和19K的蛋白，而TMV－RNA指导合成的为35K、30K、22K和17K的蛋白，其17K的蛋白虽与油菜花叶病毒的16.5K的衣壳蛋白分子质量相近，但经放射免疫沉淀试验，与TMV的衣壳蛋白无免疫沉淀反应。应用互补DNA进行同源与异源的分子杂交表明，YMV与TMV的普通株系、番茄株系、地黄株系等亲缘均较远。此外油菜花叶病毒的氨基酸组成与TMVc相差亦较大，TMVc有158个氨基酸而YMV只有149个，且大部分氨基酸的含量亦各不相同。油菜花叶病毒含有组氨酸和甲硫氨酸有别于TMVc而与长叶车前花叶病毒相同，但其C端六肽的末五个氨基酸组成却与TMVc相同，而不同于长叶车前花叶病毒。在酶降解碎片的N末端中油菜花叶病毒只有10个残基不含苏氨酸和甘氨酸，但有丙氨酸。而TMVc的N末端却有11个残基，并含有苏氨酸和甘氨酸而没有丙氨酸，两者亦有不同。综上所述，认为油菜花叶病毒为烟草花叶病毒属的一个成员。