Question

pcr出现非特异性条带是为什么？

求问可能导致的原因和可能解决的方法

Answer 1

通常如果出现非特异会首先尝试以下方法：
降低引物和聚合酶的用量，提高退火温度，或者是采用梯度PCR法，测试能够获得最佳结果的温度退火。
如果还是不行，就试试touchdown方法，退火温度从高到低，每隔一个反应温度下降1C或者怎么样的，这样可以便于扩增出特异性更好的条带。
当然，如果模板可以纯化一下，或者重新制备，也可以避免有非特异物质或者是降解的片段干扰。
总体来说，先优化。实在不行需要重新设计引物，并且将引物序列在NCBI里面和你的样品的基因组做一下比对，看看什么位置有可能造成非特异结合。