Question

质粒大提培养太久会发生什么

Answer 1

1、大肠杆菌老化

请涂布平板培养后，重新挑选新菌落进行液体培养。

2、质粒拷贝数低

由于使用低拷贝数载体引起的质粒DNA提取量低，可更换具有相同功能的高拷贝数载体。

3、菌体中无质粒

有些质粒本身不能在某些菌种中稳定存在，经多次转接后有可能造成质粒丢失。

4、碱裂解不充分

使用过多菌体培养液，会导致菌体裂解不充分，可减少菌体用量或增加溶液I、II和III的用量。对低拷贝数质粒，提取时，可加倍使用溶液I、II和III，可能有助于增加质粒提取量和质粒质量。

5、溶液使用不当

溶液II在温度较低时可能出现浑浊，应置于37℃保温片刻直至溶解为清亮的溶液，才能使用。

6、吸附柱过载

不同产品中吸附柱吸附能力不同，如果需要提取的质粒量很大，请分多次提取。若用富集培养基，例如TB 或2×YT，菌液体积必须减少；若质粒或宿主菌是非常高的拷贝数或生长率，则需调整LB培养液体积。

7、质粒未全部洗脱（尤其质粒较大时）

洗脱溶解质粒时，可适当加温或延长溶解时间。

8、乙醇残留

漂洗液洗涤后应离心尽量去除残留液体，再加入洗脱缓冲液。

9、洗脱液加入位置不正确

洗脱液应加在硅胶膜中心部位以确保洗脱液会完全覆盖硅胶膜的表面达到最大洗脱效率。

10、洗脱液不合适