Question

动物来源的病毒基因的表达是否会影响感受态细菌的生长

我们将一个鼠病毒的polmerase基因插入到pCDNA3.1中转化stabl3感受态后经菌落PCR可以鉴定出阳性克隆，但是提出来的质粒却是空载体，这是怎么回事？

Answer 1

关于动物病毒基因表达是否会影响表达菌株的生长，这个是肯定会影响的，只是影响大小的区别而已。因为你要表达的这个蛋白对于菌来说是一个外源蛋白，原本不属于这个菌所以多少会有点影响。
但是这个不是你实验失败的原因，因为你用的载体是PCDNA3.1，这是个真核表达载体，用的是真核启动子，所以这个载体并不能在菌里转录更不能翻译出蛋白。
最后说测序是空载，这可能是酶切不完全造成的，载体并没有完全切开，如果是单酶切还有可能是载体自连造成的。另外，菌落PCR很容易出现假阳性，你可以结合酶切鉴定或是菌液PCR，从而减少假阳性出现的概率。
刚开始做克隆多多少少会出现一些问题，俗话说熟能生巧，好多问题往往重复一遍就能得到解决。