Question

pcr过程是什么？

Answer 1

pcr过程是是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术。具体过程如下：

1、变性：加热使模板DNA在高温下（94℃左右）双链间的氢键断裂而形成两条单链。

2、退火；使溶液温度降至50~60℃，模板DNA与引物按碱基配对原则互补结合。

3、延伸：溶液反应温度升至72℃，耐热DNA聚合酶以单链DNA为模板，在引物的引导下，利用反应混合物中的4种脱氧核苷三磷酸（dNTP），按5'一3’方向复制出互补DNA。

PCR过程中需要注意：

1、Taq DNA 聚合酶：Taq 酶种类有很多，热启动酶，高保真酶，根据各自实验的应用选择合适的酶扩增，一般的反应，化学修饰的热启动酶即能很好的完成，化学修饰热启动酶能够避免低温下任何非特异性产物产生。

2、dNTP：四种 dNTP 的浓度要相同，其中任何一种浓度偏高或偏低，都会引发碱基的错误渗入。此外，dNTP能够和体系中镁离子结合，从而影响体系中镁离子的浓度。

3、缓冲液：缓冲液一般随酶提供，一般的 PCR 试剂盒包括 Taq 酶，缓冲液，dNTP，水。初次扩增，可以完全按照试剂盒的说明书操作，如果扩增结果有问题，可自己尝试摸索实验条件或重新设计引物提取模板扩增。

4、因空气中和手上有一定污染源，操作过程中要戴手套，在干净的环境中配置反应体系，防止空气中的污染源。

5、PCR 扩增的水要经过高压灭菌或 0.2um 滤膜过滤。

以上内容参考 百度百科-实时荧光定量PCR