Question

怎样提取DNA啊

Answer 1

就那植物来说吧!原理是一致的.方法不同.
1植物组织提取基因组DNA
一、材料
幼嫩叶子.
二、设备
移液器,冷冻高速离心机,台式高速离心机,水浴锅,陶瓷研钵,50ml离心管（有盖）及5ml和1.5ml离心管,弯成钩状的小玻棒.
三、试剂
1、提取缓冲液Ⅰ：100mmol/L Tris·Cl,pH8.0,20mmol/L EDTA,500mmol/L NaCl,1.5% SDS.
2、提取缓冲液Ⅱ：18.6g葡萄糖,6.9g二乙基二硫代碳酸钠,6.0gPVP,240ul巯基乙醇,加水至300ml.
3、80:4:16/氯仿:戊醇:乙醇
4、 RnaseA母液
5、其它试剂：液氮、异丙醇、TE缓冲液,无水乙醇、70%乙醇、3mol/L NaAc.
四、操作步骤：
1.在50ml离心管中加入20ml提取缓冲液Ⅰ,60℃水浴预热.
2.幼苗或叶子5-10g,剪碎,在研钵中加液氮磨成粉状后立即倒入预热的离心管中,剧烈摇动混匀,60℃水浴保温30-60分钟(时间长,DNA产量高),不时摇动.
3.加入20ml氯仿/戊醇/乙醇溶液,颠倒混匀(需带手套,防止损伤皮肤),室温下静置5-10分钟,使水相和有机相分层(必要时可重新混匀).
4.室温下5000rpm离心5分钟.
5.仔细移取上清液至另一50ml离心管,加入1倍体积异丙醇,混匀,室温放置片刻即出现絮状DNA沉淀.
6.在1.5ml eppendorf中加入1ml TE.用钩状玻璃棒捞出DNA絮团,在干净吸水纸上吸干,转入含TE的离心管中,DNA很快溶解于TE.
7.如DNA不形成絮状沉淀,则可用5000rpm离心5分钟,再将沉淀移入TE管中.这样收集的沉淀,往往难溶解于TE,可在60℃水浴放置15分钟以上,以帮助溶解.
8.将DNA溶液3000rpm离心5分钟,上清液倒入干净的5ml离心管.
9.加入5μl RNaseA(10μg/μl),37℃ 10分钟,除去RNA(RNA对DNA的操作、分析一般无影响,可省略该步骤）.
10.加入1/10体积的3mol/L NaAc及2×体积的冰乙醇,混匀,-20℃放置20分钟左右,DNA形成絮状沉淀.
11.用玻棒捞出DNA沉淀,70%乙醇漂洗,再在干净吸水纸上吸干.
12.将DNA重溶解于1ml TE,-20贮存.
13.取2μl DNA样品在0.7% Agarose胶上电泳,检测DNA的分子大小.同时取15μl稀释20倍,测定OD260/OD280,检测DNA含量及质量.
[注意] 5g样品可保证获得500μg DNA,足供RFLP、PCR等分析之用.