Question

高效液相色谱(HPLC)系统适用性试验是指哪些内容?进行该试验的目的是什么?

参考 中国药典 2005版 2

Answer 1

一、在高效液相色谱法系统适用性试验中，有常用的四个内容：分离度、柱效、重复性和拖尾因子。

1、分离度（resolution，R）——相邻两峰的保留时间之差与平均峰宽的比值。也叫分辨率，表示相邻两峰的分离程度。R≥1.5称为完全分离。

2、柱效：色谱柱是色谱仪最重要的部件（心脏）。柱子内径一般为1～6 mm。常用的标准柱型是内径为4.6 或3.9mm ，长度为15 ～30cm 的直形不锈钢柱。填料颗粒度5 ～10μm ，柱效以理论塔板数计大约 7000 ～10000。减小填料粒度和柱径以提高柱效。

3、拖尾因子（tailing factor，T），用以衡量色谱峰的对称性。也称为对称因子或不对称因子。

二、目的：按各品种项下要求对仪器进行适用性试验，即用规定的对照品对仪器进行试验和调整，应达到规定的要求；或规定分析状态下色谱柱的最小理论板数、分离度和拖尾因子。

扩展资料

高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography \ HPLC）又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“近代柱色谱”等。

LLPC与GPC有相似之处，即分离的顺序取决于K，K大的组分保留值大；但也有不同之处，GPC中，流动相对K影响不大，LLPC流动相对K影响较大。

参考资料来源：百度百科-高效液相色谱法

Answer 2

系统适应性实验

系统适应性实验参数和合格标准是建立基础是：仪器，电子元件，分析操作和待测样品是个不可分割的整体。系统适应性实验确保系统在样品分析的时候能很好地运行。在分析方法中应当要包括适当的系统适应性合格标准。

所有的色谱分析方法都应当要有系统适应性实验及相应的合格标准。CDER评审官指南<<色谱分析方法的验证>>（1994年11月）对用于评估系统适应性的典型参数进行了定义和讨论。

建议系统适应性实验应成为所有分析方法的一部分，而不仅仅是色谱分析方法。无论是哪类分析方法，都要采用实验来证实该系统能不受环境条件的影响而正确地运行。比如说，滴定法一般来说需要进行空白实验。

F．标准品的制备

要有所有标准品溶液（比如，储备液，工作对照品溶液，内部对照品溶液）的配制方法。

G.操作过程

应当要按操作步骤对操作过程进行逐步叙述。叙述应当要适当包括如下信息：平衡时间，样品进样顺序和系统适应性或启动参数。需标明不常见的危险。

I．计算

应当要提供代表性计算公式，并要列表说明所有符号和数字系数，及计算降解产物和杂质的特殊使用说明。所有用于数据分析的数学转换或公式应详细描述。这些包括对数转换以获得指数数据的线性关系，或多元回归分析的使用。

J.结果报告

1．通则

应该规定关键计算步骤中的数字单位（例如，‘标签’标示量的百分比，W/W，W/L，ppm等）

2．杂质分析规程
在有关原料药和产品的杂质检测规程中，应当包括杂质的名称和检测位/标志（例如，保留时间RT，相对保留时间RRT），以及杂质的种类（比如工艺降解产物，赋形剂降解产物），如有可能，还应当指明检测限DL或定量限QL。也可以在原料药检测中设置DL和QL。

有机杂质的报告中，应当包括：1、有记载的已经过确认的杂质的名称；2、有记载但未经过确认杂质的（检测）位/标志；3、所有的没有记载的杂质，以及；4、总杂质。总有机杂质是指所有达到或超过其自身定量限度的杂质的总量。在这里可以参考FDA杂质指南文章中有关判定定量限度的内容（看后面的参考）。无机杂质和溶剂的残留，也应该被提到。

对于产品以及原料药的工艺杂质也可以不包括在报告中，除非分析规程和控制环节中描叙了一个可以被接受的原则，那么，在产品制造和包装过程中（包括贴签）产生的杂质就要被提到。

并不是所有产品（比如，生物制剂、生物工艺制剂、植物制剂、放射制剂）的报告都必须严格按照以上谈到的内容来写，但是所有关键的工序以及产品相关的杂质都要有检测和报告。

VII．NDA，ANDA，BLA和PLA中的分析方法验证
A．非药典分析方法
在NDA，ANDA，BLA或PLA中，应当要递交资料以说明检测中所用的分析方法是满足适当的准确度和可靠性要求(21 CFR 211.194(a)92))。分析方法验证是个论述分析方法是适用于其拟定用途的过程。在递交资料时，NDA，ANDA，BLA或PLA中应当要包含分析方法验证资料以支持分析方法的准确度。

ICH指导原则Q2A：分析方法验证（1995年3月）和Q2B：分析方法验证：方法学（1996年11月）给出了分析方法验证的建议。对于超出ICH指导原则范围的分析方法也是需要验证的。

1.验证项目

申请者应当要送交其所拟定分析方法的验证项目方面的信息（见ICH Q2A和ICH Q2B）。尽管不是对于所有类型的分析方法都需要进行所有的验证项目（见第VII.A.3章），但还是有典型的验证项目，如：

Accuracy

Precision (repeatability and intermediate precision)

Specificity

Detection limit

Quantitation limit

Linearity

Range

Robustnes

准确度

精密度（重复性和中间精密度）

专属性

检测限

定量限

线性

范围

耐用性

2.其它验证资料
分析方法验证资料还应当要包括：

说明所有分析制备样品在完成分析所需的时间内的稳定性的资料。

L清晰可读的仪器代表性输出和记录资料（如色谱图）和原始资料输出（积分面积）。安慰剂，对照品和样品的仪器输出也都是需要提供的（见第VII.A.2.c章）。

Re.

代表性计算公式，以表明原料药中的杂质是如何计算的。(见VII.A.2.b章）。对于杂质分析方法，要标明杂质的名称和位置标识符（如，色谱中的相对保留时间RRT）。

对于原料药：

1. 讨论可能会形成的异构体并讨论异构体的控制。

对每个有机杂质进行适当的标识和界定。不是所有的产品（如，植物药）都需要这些资料的。对于其它杂质（如无机杂质，残留溶剂），应当要进行说明并定量分析。

FDA的指导文件，如比ICH指导原则Q3A 新原料药中的杂质（1996年1月）。

已知杂质列表，包括工艺杂质，降解产物和可能的异构体。如果知道结构的话，也需提供。

对于制剂：

原料药在制剂中可能的降解途径。通过准确度实验论证的样品回收率资料。要有资料论证无论是新制的安慰剂还是分解了的安慰剂都不会影响活性成分的定量分析。ICH Q2A和ICH Q2B几乎对所有的验证参数都进行了论述。下面论述的是那些还需要更详细地进行论述的方面。

a.耐用性

ICH Q2A和ICH Q2B对耐用性是有论述的，它衡量的是分析方法在细微的变化下不受影响的能力。该实验应当是在分析方法开发过程中进行的，对实验结果进行讨论和/或递交。如果观察到有影响，需提供代表性仪器输出（如色谱图）。

b.强降解实验

FDA很多关于药品稳定性的指导原则都对强降解实验进行了论述。

在申请的稳定性一章中应当要提供的资料有：强降解实验设计和实验结果。而代表性仪器输出（如：色谱图）和/或其它资料（强降解实验中所得的降解信息）应当要提供在分析方法和控制 一章中。

c.仪器输出/原始资料

i. 有机杂质

应当要提供代表性资料以支持有机杂质的评估。一般来说，是不需要残留溶剂的代表性资料的。仪器输出和原始数值（比如，峰面积）及合适的标记和标注（比如，色谱峰的保留时间，核磁共振的化学位移和耦合常数）都应当要提供。根据所提供的定量限和仪器输出对杂质情况进行评估。还应当要提供其它资料以确认杂质情况得到了充分地界定。比如说，比如说，代表性图谱选用的检测波长是205nm，则可以将拟定的运行时间延长至两倍以支持分析方法的专属性。

在定量分析时，原料药的响应因子可用于没有相应对照品的杂质。如果响应因子不接近的话，只要应用了较正因子或或者杂质实际上是被高估的话，这样做也是可行的。用于评估指定杂质或未指定杂质的合格标准和分析方法经常都是基于分析假设的（比如，相当的检测器响应）。应当要对这些假设进行讨论和合理性说明。

ii.原料药

ANDA和相关的递交，用于生物利用度研究的批次（biobatch）或者提交批次（submission batch）的相关资料应当要提供。所有的响应（比如，色谱峰）都应当要进行标注。所用的分析方法应当要有能力区分先前批次和当前批次之间的变化，如果有这些变化的话。应当要说明定量限和有机杂质的类型（比如：降解物，工艺杂质）。还需提供分析方法编号，批号，生产日期和生产地点及分析日期。

iii.制剂

在制剂的分析方法和控制一章中，应要当提供的资料有：代表性批号在长期和加速稳定性实验条件下及强降解实验条件下的仪器输出（如，图谱）和原始资料（如峰面积）。对于ANDA和相关递交，应当要提供生物利用度实验批次或递交批次的适当资料。在申请的稳定性章节中应当要引用原始资料（比如：图谱）。

至少，递交材料中应当要包括放行检测(Release testing)的仪器输出和原始资料. 需标注所有的响应信号（如色谱峰）。此外，还要提供，分析方法编号，制剂的批号，生产日期，分析日期，原料药的来源和批号，生产地点及容器/密闭系统信息。如在过往批次和现批次之间存在差异的话，所用的分析方法应当要有能力区分出来。应当要报告检测限和类型（如，降解物，包装时的漏出物）。

3.各类检测的推荐验证项目

表1概述了在不同分析方法的验证过程中所需要的验证项目。同一分析方法可用于多个用途。验证资料需要能支持该分析方法的拟定用途。比如说，如果拉曼光谱用于定量分析多晶型杂质，或手性HPLC用于分析异构体杂质，则要应用表1中杂质定量分析 中所推荐的验证项目。然而，如果拉曼光谱或手性HPLC被用于鉴定或特征实验的话，则要应用表1中所推荐的这些类型的验证项目。

Answer 3

柱效（理论板数）、分离度（大于1.5）、拖尾因子（0.95-1.05）三项。
目的是衡量该色谱条件下的色谱系统（主要是柱子），是否适用于该方法。

Answer 4

理论板数，分离度，灵敏度，拖尾因子，重复性 五项指标