Question

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The substitution of Ala in this study for an Arg in the native proapoA-I should not have any significant structural effects, as the charged Arg is expected to be even more exposed to solvent than is Ala. However, this amino acid substitution could have an effect on intramolecular interactions.

This study also shows that there are no discernible differences in the lipid-binding properties nor LCAT activation between proapoA-I and apoA-I. The structure and stabilities of both types of rHDL particles (79 A and 98 A in diameter) are very similar. From our past work (28), we know that these two subclasses of particles contain two distinct conformation of apoA-I that activate LCAT very differently (15- to 20-fold) and are interconverted by removal of phospholipid. From this work, it is clear that the extreme N-terminus of apoA-I is not involved in this conformational adaptation.

As suggested by the essentially identical structure of proapoA-I and apoA-I in the lipid-bound forms, their ability to activate LCAT was also the same. This confirms the observation of other investigators that binding of monoclonal antibodies specific for N-terminal sequences of apoA-I do not affect LCAT activation (38, 39).

From the practical standpoint, our extensive characterization of the product of this expression system by comparison with mature apoA-I has demonstrated the usefulness of this system for the production of significant amounts of proapoA-I mutants for the study of the structure and function of apoA-I.

Answer 1

研究中发现,因为带电的精氨酸比丙氨酸更倾向于暴露到溶剂中，所以用丙氨酸替代原生的前载脂蛋白A-I上的精氨酸，并不会有显著的结构效应。然而，这种氨基酸的替换却对分子内相互作用有影响。

同时，研究表明前载脂蛋白A-I和载脂蛋白A-I在脂结合以及转移卵磷脂胆固醇脂酰转移酶（LCAT）的性质方面也没有明显的差异.并且，直径79 A 和 98 A两种类型的rHDL颗粒在结构和稳定性上都非常相似。从过去的工作中，我们知道到这两个亚类的粒子含有两种不同的构象的载脂蛋白A - I，而这两种载脂蛋白可以激活差别明显的15-20折叠的LCAT，并且两种载脂蛋白之间可以通过磷脂基团的去留发生转换。这项工作可以清楚的说明载脂蛋白A-I的氨基末端并没有参与到这种构象适应中来。

前载脂蛋白A - I和载脂蛋白A - I的脂质结合形式的在本质上的同一性表明，他们也具有相同的激活LCAT的能力。这证实了其他研究者的发现：载脂蛋白A - I与其氨基末端单克隆抗体的结合并不影响它对LCAT的激活。

从现实的角度看，我们这套表达系统的产品与成熟的载脂蛋白A - I的大量比较，证明这个系统能够生产大量的前载脂蛋白A - I型突变体，用于研究载脂蛋白A - I的结构和功能。

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Answer 2

替代丙氨酸在本研究中的精氨酸在本地proapoA ，我不应该有任何重大的结构性影响，如收取精氨酸预计将更加暴露于溶剂相比，阿拉巴马州然而，此氨基酸替代可能会影响分子的相互作用。

这项研究还表明，有没有明显的差异，脂质结合性能也不转移酶的激活之间proapoA - I和载脂蛋白A - I 。的结构和稳定性这两种类型的rHDL颗粒（ 79和98的直径）非常相似。从我们过去的工作（ 28 ） ，我们知道，这两个亚类的粒子含有两种不同的构象的载脂蛋白A - I的启动非常不同的转移酶（ 15 - 20倍） ，并interconverted通过取消磷脂。这项工作，很显然，极端的N -末端的载脂蛋白A - I是没有参与这一构适应。

所建议的结构基本相同的proapoA - I和载脂蛋白A - I中的脂质结合的形式，他们有能力转移酶激活也相同。这证实了观察其他调查员说，有约束力的单克隆抗体的N -末端序列的载脂蛋白A - I不影响转移酶的激活（ 38 ， 39 ） 。

从现实的角度看，我们广泛的表征产品这一表达系统的比较成熟的载脂蛋白A - I已经证明是有用的这系统为生产大量的proapoA I型突变体的研究结构和功能的载脂蛋白A - I 。

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