Question

为什么目的基因要先转移到DH5a，再到BL21

Answer 1

为什么目的基因要先转移到DH5a，再到BL21
DH5a和BL21都可以作为表达宿主。
BL21 是蛋白酶缺陷株，表达出来的蛋白不会被降解，做蛋白表达是比较适合用的，。
BL21生长要比DH5a快，这是他们的又一区别，在高密度发酵BL21表达蛋白时，需要控制它的表达条件，使得高密度且高表达。
DH5a复制稳定的特点，所以它是核酸疫苗通常使用的宿主株。
DH5a中表达时外源基因的启动子必须被大肠杆菌的RNA POLYMERASE 识别，比较好用的载体有PLPR可诱导的启动子。而带有T7 启动子的载体则不能在其中表达，因为识别T7 启动子的T7 RNA POLYMERASE 在DH5a中没有。
对于BL21，已将T7 RNA POLYMERASE 的编码基因整合到了菌的基因组上，能识别T7 启动子，从而可容纳外源基因在此T7启动子的带动下表达。