Question

粗提纯DNA中Nacl浓度越高越好吗?提纯的重点是哪些?

Answer 1

在DNA的粗提纯过程中，高盐浓度有利于DNA的溶解和纯化，但是盐浓度过高也会影响纯化效果。通常在DNA粗提纯中使用NaCl浓度为0.15M的TE缓冲液，可有效维持DNA的稳定性。如果鉴定所需的DNA量小于50ug，则可以缩小提纯过程中的缓冲液量和NaCl浓度，这样可以减少离心和洗涤步骤的时间和次数。

关于DNA粗提纯的重点有以下几方面：
1. 原料样品的选取和处理：原料的质量和纯度对于DNA的提取和纯化至关重要。在选取样品时最好选择高质量和纯度的DNA，避免样品受到污染或分解等影响提纯过程。
2. 细胞裂解和DNA溶解：细胞裂解和适当的pH值、温度和混合剂对于DNA的提取和纯化至关重要。常见的方法有酚/氯仿法，碱解法和热激法等。
3. DNA的纯化和分离：纯化和分离的目的在于去除所有可能干扰的物质，如蛋白质、RNA、多聚物等。常用的方法有热沉淀法、硅胶柱层析法、酚/氯仿法和离心沉淀法等。
4. 最终DNA的浓缩和保存：在提取和纯化过程中，需要注意维持DNA的稳定性和完整性。最终得到的DNA需要测定浓度，并进行适当的保存。