测定吸光度时,应使吸光度在什么范围内较合适?

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小猪猪的美食笔记
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2023-07-01 · 小猪猪的美食笔记
小猪猪的美食笔记
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按照光度误差的要求,测定的吸光度,应该在0.2~0.8 的范围内。

根据比尔定律,吸光度与试样浓度成正比,在不同的吸光度范围内测量,可引起不同的误差,分析工作者应予高度重视,分析样品浓度太低或浓度太高,吸光度值超越了合适的范围,都不会得到满意的结果,应使被分析样品的吸光度范围控制在一个合理的范围内。

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当光度噪声大到一定程度、吸光度小到一定程度时, 吸光度就根本不与样品的浓度成正比,甚至会产生试样浓度变稀时, 吸光度值反而增大( 噪声所致) ,以致无法得到稳定的测量数据,在常规分析时,对大多数试样浓度大多取10~100μg/ ml , 相当0. 3~0. 7Abs 左右为最佳。

试样也不能太浓,吸光度也不能太大,如果试样的吸光度太大,因为杂散光的原因,使分析测试结果严重偏离比耳定律,可能会使分析误差增大,甚至会产生试样浓度增大时, 吸光度值反而减小等反常现象,杂散光可能使分析测试结果的数据偏小,也可能偏大;若测试波长以外的杂散光被试样吸收则测量数据偏小,若测试波长杂散光不被试样吸收则测量数据偏大。

在试样量允许时,试样应选择靠近最佳吸光度值( 0. 434Ab s ) 的浓度,从理论上讲,吸光度值为最佳值0. 434Abs 时,分析误差最小。如果被测试样太浓时,应向靠近0. 434Abs 的方向稀释,在不同的吸光度上测试,相对误差和绝对误差都不同。

参考资料来源:百度百科-吸光度

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