Question

做荧光定量pcr时，rt产物需要稀释吗

Answer 1

做荧光定量pcr时，rt产物需要稀释吗
用已知浓度的DNA样本（通常是质粒）梯度稀释成一系列的样本。做实验的时候，这些标准品和待测样本加在同样一块96孔盘的不同孔内。一起做PCR。
可以稀释,一般反转录的体系在10ul,而定量时需要的反应个数较多,一般包括目的基因和内参基因,甚至会有多个基因需要检测,而且会进行2~3个重复平行试验,所以直接反转体系会不足,可以考虑稀释,由于一般是做相对定量,不会影响结果.标准品的荧光强度和已知的浓度作图，可以得到一条标准曲线。而待测样本的荧光强度测出以后，就可以在标准曲线上算出样本浓度了。