Question

平末端酶切位点有哪些？怎样判断酶切位点是粘性末端还是平末端

Answer 1

怎样判断酶切位点是粘性末端还是平末端
用限制酶切割后得到的末端齐平就是平末端,一长一短就是粘性末端
根据限制性内切酶切割DNA所产生的产物末端,发现限制性内切酶对DNA的切割有两种方式,即平切和交错切.所谓平切,就是限制性内切酶在DNA双链的相同位置切割DNA分子,这样产生的末端就是平末端.交错切就是限制性内切酶在DNA双链的不同位置切割DNA,产生的DNA片段的末端不是平齐的

Answer 2

环状DNA载体，那就是质粒，或者粘粒什么的了。。
如果购买的是商业用载体的话，如果是多酶切位点那段的酶切位点去掉是不会不会使目的基因所表达的蛋白质失活的，但是如果是不在多酶切位点的话，就可能使其它的“框架”受到影响，比如amp抗性或者clo抗性的失效（致命影响后期筛选）等。
如果是多酶切位点的话，此区域的酶切位点不可能通过双酶切去掉，所以建议设计合理的pcr引物进行此敲基因操作，这个跟进行定点突变的原理差不多，所以只要设计一个引物就可以了，但是该试剂盒价格比较贵，在两万左右（20次反应），外加引物设计及后期测序要￥2500左右。
原理：
其实就是PCR反应原理：
DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链，在DNA聚合酶与启动子的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。在实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，并设计引物做启动子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。通过设计特定的引物来达到改变基因的效