Question

质粒提取原理

Answer 1

质粒是细胞内的一种环状的小分子DNA 是进行DNA重组的常用载体 作为一个具有自身复制起点的复制单位独立于 细胞的主染色体之外 质粒DNA上携带了部分的基因信息 经过基因表达后使其宿主细胞表现相应的性状 在DNA重组中 质粒或经过改造后的质粒载体可通过连接外源基因构成重组体
从宿主细胞中提取质粒DNA 是DNA重组技术中最基础的实验技能 分离质粒DNA有三个步骤
培养细菌使质粒扩增 收集和裂解细菌 分离和纯化质粒DNA
在质粒提取过程中 由于机械力 酸碱度 试剂等的原因 可能使质粒DNA链发生断裂 所以 多数质粒粗提取物中含有三种构型的质粒 共价闭合环状DNA（cccDNA）质粒的两条链没有断裂 超螺旋开环DNA（ocDNA）质粒的一条链断裂 松弛的环状分子线形DNA（lDNA） 质粒的两条链均断裂 线性分子质粒DNA的分子构型
质粒DNA琼脂塘凝胶电泳模式图可分为 松弛线性的DNA 松驰开环的OC构型超螺旋的SC构型 由于琼脂糖中加有嵌入型染料溴化乙锭 因此 在紫外线照射下DNA电泳带成橘黄色 道中的SC DNA走在最前沿 OC DNA则位于凝胶的最后边 道中的L DNA是经核酸内切限制酶切割质粒之后产生的 它在凝胶中的位置介于OC DNA和SC DNA之间