利用分光光度法测量时,若△T=±0.5%.吸光度为适当数值时,光度误差最小,该数值为
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吸光度A与透光率T之间的关系: 分光光度法测定时,一般要求吸光度A在0.2-0.8之间,因为当吸光度在0.187-0.824之间时,浓度的相对误差在2%以内。分光光度法:通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度,对该物质进行定性和定量分析的方法。它具有灵敏度高、操作简便、快速等优点,是生物化学实验中最常用的实验方法。许多物质的测定都采用分光光度法。在分光光度计中,将不同波长的光连续地照射到一定浓度的样品溶液时,便可得到与不同波长相对应的吸收强度。原理:朗伯一比尔(Lambert - Beer)定律是分光光度法的基本原理。当一束单色光通过一均匀的溶液时,一部分被吸收,一部分透过,设入射光的强度为I0,透射光强度为I,则I/I0为透光度,用T表示。 1.当溶液的液层厚度不变时,溶液的浓度越大,对光的吸收程度越大,则透光度越小。即:-lgT=a*c(式中a为吸光系数,c为浓度)当溶液浓度不变时,溶液的液层厚度越大,对光的吸收程度越大,则透光度越小。即:- lgT=a*b(b为液层厚度)将以上两式合并可用下式表示:lgT=a*b*c 2.研究表明:溶液对光的吸收程度即吸光度(A)又称消光度(E)或光密度(OD)与透光度(T)呈负对数关系,即:A=-lgT 因此A=a*b*c,即朗伯一比尔定律,其意义为:当一束单色光通过一均匀溶液时,溶液对单色光的吸收程度与溶液浓度和液层厚度的乘积呈正比。
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