Question

蛋白质多肽链N端测定的方法及基本原理

Answer 1

1.甲醛滴定法：氨基酸氨基的PKa值较小，羧基的PKa值较大，若用滴定法测定氨基或羧基竭力释放出的H+，均找不到合适的试剂。但若加入甲醛溶液中，氨基酸中的氨基作为亲和试剂与甲醛中的羧基发生加成反应，使氨基酸氨基的PKa下降，以酚酞为指示剂，用NaOH滴定测定游离氨基的含量。
2.
2,4-二硝基氟苯的反应
氨基酸的α-氨基与.
2,4-二硝基氟苯在弱碱性溶液中作用，生成稳定的.
2,4-二硝基氟苯氨基酸，呈黄色。
3.丹磺酰氯DNS-CL
氨基酸的α-氨基与..丹磺酰氯DNS-CL
生成的5-二甲氨基萘磺酰氨基酸有强烈的荧光，可以荧光光度计检测出来。
4.与异硫氰酸苯酯反应
在在弱碱性条件下，氨基酸的α-氨基与异硫氰酸苯酯反应，生成相应的苯氨基硫甲酰氨基酸，与酸作用会环化为苯硫乙内酰脲，在酸中较稳定。生成的苯氨基硫甲酰氨基酸经乙酸乙酯抽提干，用层析法进行鉴定，确定N端氨基酸的种类。