Question

常用于蛋白质多肽链N端.C端测定的方法有几种

Answer 1

(1)N-末端测定 　　A.二硝基氟苯(FDNBDNFB)：1945Sanger提重要贡献　　DNP-氨基酸用机溶剂抽提通层析位置鉴定何种氨基酸Sanger用测定胰岛素N末端别甘氨酸及苯丙氨酸　　B.氰酸盐：1963Stank及Smyth介绍种测定N末端新步骤：　　由于乙内酰脲氨基酸带电荷用离交换层析与游离氨基酸离所乙内酰脲氨基酸再盐酸水解重新游离氨基酸鉴别氨基酸即解N-末端何种氨基酸　　C.二甲基氨基萘磺酰氯：1956Hartley等报告种测定N-末端灵敏采用1-二甲基氨基萘-5-磺酰氯简称丹磺酰氯与游离氨基末端作用类似于SangerDNFB产物磺酰胺衍物　　丹磺酰链酸具强烈黄色荧光优点灵敏性较高(比FDNB提高100倍品量于1毫微克)及丹磺酰氨基酸稳定性较高(酸水解稳定性较DNP氨基酸高)用纸电泳或聚酰胺薄膜层析鉴定　　(2)C-末端析　　A.肼解：测定C-末端用肽溶于水肼100℃进行反应结羧基末端氨基酸游离氨基酸状释放其余肽链部与肼氨基酸肼　　羧基末端氨基酸采用抽提或离交换层析其进行析羧基末端氨基酸侧链带酰胺冬酰胺谷氨酰胺则肼解能产游离羧基末端氨基酸外肼解注意避免任何少量水解免释氨基酸混淆末端析　　B.羧肽酶水解：羧肽酶专性水解羧基末端氨基酸根据酶解专性同区羧肽酶A、BC应用羧肽酶测定末端需要事先进行酶力实验便选择合适酶浓度及反应间使释放氨基酸主要C末端氨基酸

Answer 2

N-末端分析1、二硝基氟苯法（FDNB法）2、二甲基氨基萘磺酰氯法（DNS-Cl法）3、异硫氰酸笨酯法（Edman法）C-末端分析1、肼解法2、还原法3、羧肽酶法