Question

质粒dna的提取中,为什么要高速离心

Answer 1

质粒dna的提取中，要高速离心的原因：冷冻离心是最后乙醇或者异丙醇沉淀DNA后的操作，低温能保证DNA溶解度小，能够获得尽可能多的沉淀。你也可以不冷冻，只不过量就少一点。

第一次离心是在细胞破碎后，目的是除去溶液中的固体杂质。第二次离心是在第一次离心的上清中加入苯酚/氯仿/异戊醇溶液以后，目的是将DNA和蛋白质等杂质分离。第三次离心是在第二次离心的上清中加入氯仿/异戊醇溶液之后，目的是进一步纯化DNA、并除去上一步中引入的苯酚。

凝胶电泳分析

影响琼脂糖凝胶电泳DNA迁移率的因素：DNA分子大小，DNA分子越大迁移速度越慢。迁移率与琼脂糖浓度成反比。DNA构象：a.相同分子量的超螺旋环状（Ⅰ型），切口环状（Ⅱ型），线状（Ⅲ型）DNA，以不同速率通过凝胶。b.一般情况下，迁移率Ⅰ型>Ⅲ型>Ⅱ型。电压：迁移率与所加电压成正比，但是电压过大有效分离范围减小。