Question

试述多肽链中氨基酸顺序分析的基本分析方法(Sanger法)。

Answer 1

【答案】：(1) 分析纯化蛋白质的组成，计算出各氨基酸在蛋白质的个数。
(2) 测定多肽链的氨基末端氨基酸和羧基末端氨基酸(末端可采用二硝基氟苯，C末端可采用羧肽酶)。
(3) 将蛋白质水解为较小的片段以作进一步分析。可用胰蛋白酶(水解碱性氨基酸羧基所生成的肽键)、糜蛋白酶(水解芳香族氨基酸羧基形成的肽键)或溴化氰(水解蛋氨酸羧基形成的肽键)水解为片段，分别测序，根据片段的重叠情况拼出整条蛋白质链的顺序。
(4) 测定多肽链上二硫键的位置。目前具体方法多有进步，但基本原则依旧。