Question

PCR实验方法步骤

Answer 1

PCR在分子克隆和DNA分析中有多种用途，下面小编就向大家介绍PCR实验方法步骤：

方法

• 1/4

  
  在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。      

  10×PCR buffer                    

  5 μl     dNTP mix （2mM）              

  4 μl     引物1（10pM）                  

  2 μl     引物2（10pM）                  

  2 μl     Taq酶 （2U/μl）                

  1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）   

  1 μl      加ddH2O至 50 μl   

  视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
  

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• 2/4

  调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，最后在72℃ 保温7min。
  

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• 3/4

  结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

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• 4/4

  
  PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl氯仿进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

  
  END

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