怎么才能让电泳出来的DNA或RNA清晰呢?
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不论是DNA、RNA还是蛋白,漂亮的电泳条带的基础是样品质量要好。
1. RNA:RNA提取过程中不发生降解的话,一般普通的琼脂糖电泳会得到3条清晰地条带,上面两条比较亮,且第一条是第二条亮度的2倍,第三条比较淡。如果样品稍有降解,也会看到3条带,但最后一条较量,前两条亮度相当或第二条比第一条稍亮。
如果还想使图谱更漂亮,可以跑变性胶电泳。比如甲醛变性琼脂糖或尿素变性PAGE。
2. DNA:一般DNA提取后直接电泳,在最上部有清晰的DNA条带,无无拖尾,且点样孔无亮斑。一般我们检测DNA都是检测PCR过后的产物。这时要想获得清晰地图谱要考虑以下几个因素:DNA质量、引物、PCR体系及反应条件。这些因素需要你在实验过程中慢慢摸索。还有一点就是要用新配制的胶且胶的浓度要合适。有时候,实验要求不同,有引物二聚体或非特异性扩增对结果没有什么影响,且有时候这些无法避免。如果引物或反应条件合适的话,你的电泳图谱上你的目的条带应该是最清楚最亮的,并且非目的条带没有或很少,且引物二聚体较淡,这样整体看起来,电泳图谱还是会很清晰地。
3. 蛋白:不好意思,我没做过蛋白的实验,不知道应该注意哪些,但我想样品质量还是同样重要的。
这只是自己的一点感受,希望能帮到你。
1. RNA:RNA提取过程中不发生降解的话,一般普通的琼脂糖电泳会得到3条清晰地条带,上面两条比较亮,且第一条是第二条亮度的2倍,第三条比较淡。如果样品稍有降解,也会看到3条带,但最后一条较量,前两条亮度相当或第二条比第一条稍亮。
如果还想使图谱更漂亮,可以跑变性胶电泳。比如甲醛变性琼脂糖或尿素变性PAGE。
2. DNA:一般DNA提取后直接电泳,在最上部有清晰的DNA条带,无无拖尾,且点样孔无亮斑。一般我们检测DNA都是检测PCR过后的产物。这时要想获得清晰地图谱要考虑以下几个因素:DNA质量、引物、PCR体系及反应条件。这些因素需要你在实验过程中慢慢摸索。还有一点就是要用新配制的胶且胶的浓度要合适。有时候,实验要求不同,有引物二聚体或非特异性扩增对结果没有什么影响,且有时候这些无法避免。如果引物或反应条件合适的话,你的电泳图谱上你的目的条带应该是最清楚最亮的,并且非目的条带没有或很少,且引物二聚体较淡,这样整体看起来,电泳图谱还是会很清晰地。
3. 蛋白:不好意思,我没做过蛋白的实验,不知道应该注意哪些,但我想样品质量还是同样重要的。
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研载生物科技(上海)有限公司_
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