Question

如图表示某种绿色荧光蛋白基因表达载体的构建过程．绿色荧光蛋白基因有720个碱基对（bp），质粒有5369个

如图表示某种绿色荧光蛋白基因表达载体的构建过程．绿色荧光蛋白基因有720个碱基对（bp），质粒有5369个碱基对（bp），其上酶切位点和标记基因如图．请回答：（1）限制酶BamHI的识别序列和切割位点是G↓GATTC，则该酶切割DNA后形成的黏性末端是______．过程③所需的工具酶是______．（2）②过程可以通过PCR技术进行，为了准确获取目的基因，设计引物对是关键．设计引物对的依据______．（3）基因工程中常用限制酶酶切后再电泳的方法进行重组质粒的鉴定和筛选，电泳时DNA片段的迁移速率与片段大小呈负相关．①图中质粒经BamHⅠ、HindⅢ双酶切后进行电泳，出现了一条长度为5300bp的DNA条带（如图1），而重组质粒经BamHⅠ、HindⅢ双酶切，电泳后形成了两条长度分别为______和______的腿片段条带．②图中质粒经BamHI单酶切后电泳图谱如图2．请在答题纸相应图中画出重组质粒用BamHI单酶切并电泳后条带所在的大致位置．______（4）该基因工程中的受体细胞无任何抗生素抗性，某同学用只含有氨苄青霉素的培养基筛选导入重组质粒的受体细胞．他能否成功？为什么？______．





Answer 1

（1）限制酶BamHI的识别序列和切割位点是G↓GATTC，则该酶切割DNA后形成的黏性末端是GATTC--．过程③表示切割后的目的基因和质粒发生重组，该过程需要DNA连接酶．
（2）目的基因的扩增可以通过PCR技术进行，为了准确获取目的基因，设计引物对是关键，设计引物对的依据绿色荧光蛋白基因两端的部分DNA序列．
（3）①根据题意可知，绿色荧光蛋白基因有720个碱基对（bp），质粒有5369个碱基对（bp）．图中质粒经BamHⅠ、HindⅢ双酶切后进行电泳，出现了一条长度为5300bp的DNA条带（如图1），说明5300bp的DNA条带是原质粒中切去部分片段的质粒；而目的基因也用这两种酶进行切割，因此形成的重组质粒上仍然存在这两种酶的识别位点．则重组质粒经BamHⅠ、HindⅢ双酶切，电泳后形成了两条长度分别为5300bp（质粒）和720bp（目的基因）的片段条带．
②质粒有5369个碱基对，质粒经BamHI单酶切后碱基长度不变．而重组质粒的长度=5300+720=6020kb，用BamHI单酶切割长度也不变．由于电泳时DNA片段的迁移速率与片段大小呈负相关，因此电泳后重组质粒在图2中质粒之上．
（4）由于该基因工程中的受体细胞无任何抗生素抗性，而导入质粒或重组质粒的受体细胞都具有氨苄青霉素抗性，都能正常生长，因此用只含有氨苄青霉素的培养基筛选导入重组质粒的受体细胞不能成功．
故答案为：
（1）GATTC--DNA连接酶  
（2）绿色荧光蛋白基因两端的部分DNA序列
（3）①5300bp    720bp  
 ②如右图

（4）不能成功，导入质粒或重组质粒的受体细胞都具有氨苄青霉素抗性，都能正常生长