Question

引物f是正向还是反向

Answer 1

引物f是正向和反向都可以。

正向引物和反向引物是相对的，通常以一个双链DNA（上面的那条链）的上游结合部位称为正向引物，是从左到右的方向，也就是5-3的方向，而下面那条互补链的下游结合部位称为反向引物。

其方向是从右到左的，因为下面的链的方面从左到右是3-5，从右到左就是5-3了，PCR的扩增的确是一条引物就可以扩增了。

GC含量：

引物序列的 GC 含量一般为 40-60%，过高或过低都不利于引发反应。上下游引物的 GC含量不能相差太大。

Tm值引物所对应模板位置序列的 Tm 值在 72℃左右可使复性条件最佳。Tm 值的计算有多种方法，如按公式 Tm=4(G+C)+2(A+T)，在 Oligo 软件中使用的是最邻近法(the nearestneighbor method)。

端避开密码子第3位如扩增编码区域，引物3′端不要终止于密码子的第3位，因密码子的第3位易发生简并，会影响扩增的特异性与效率。