Question

用pmd-18t载体克隆基因，能用M13测序吗

要克隆基因，用的是TAKARA的PMD-18T载体，可以用M13测序吗？克隆基因最后这几步具体怎么做，望高人指点！万分感谢！！

Answer 1

可以。
克隆基因最后这几步你是指什么？你将基因连到T载体上，测序验证对了，就行了。接下来构建载体什么的，直接可以用T载体上序列做模版了。

Answer 2

可以
制品说明
pMD18-T Vector、pMD19-T Vector是一种高效克隆PCR产物 (TA Cloning) 的专用载体。这两种载体分别由 pUC18、pUC19载体改建而成，在pUC18、pUC19载体的多克隆位点处的Xba I和Sal I识别位点之间插入了EcoR V识别位点，用 EcoR V进行酶切反应后，再在两侧的3'端添加 "T" 而成。因大部分耐热性DNA聚合酶进行PCR反应时都有在PCR产物的3'末端添加一个 "A" 的特性，所以使用这两种制品可以大大提高PCR产物的连接、克隆效率。
由于这两种载体是分别以pUC18、pUC19载体为基础构建而成，所以它具有同pUC18、pUC19载体相同的功能。此外，这两种制品中的高效连接液 Ligation Mix可以在极短时间内 (约5分钟) 完成连接反应，且此连接液可以直接用于细菌转化，大大方便了实验操作。制品中的 Control Insert (500 bp) 还可以用于Control反应。
pMD19-T Vector与pMD18-T Vector相比，pMD19-T Vector的b-半乳糖苷酶的表达活性更高，菌落显示蓝色的时间缩短，菌落显示的蓝色更深。因此，克隆后更容易进行克隆体的蓝白筛选。

纯度
Control Insert经克隆后的白色菌落中，有90%以上含有Insert DNA片段。
Control Insert经克隆后，用双脱氧测序法确认多克隆酶切位点及T碱基的存在。

用途
进行TA克隆，克隆PCR产物。
对克隆后的PCR产物使用BcaBESTTM Sequencing Primers、M13 Primers进行DNA测序。

http://tong.dxy.cn/info/infoSupplyView.htm?id=50c35b041b977f34011b97871727221c