Question

DNA酶切产物再纯化后电泳，怎么看起来变长了

Answer 1

DNA酶切产物再纯化后电泳，怎么看起来变长了
限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上，并切割双链DNA。它可分为三类：Ⅰ类和Ⅲ类酶在同一蛋白质分子中兼有切割和修饰（甲基化）作用且依赖于ATP的存在。Ⅰ类酶结合于识别位点并随机的切割识别位点不远处的DNA，而Ⅲ类酶在识别位点上切割DNA分子，然后从底物上解离。Ⅱ类由两种酶组成： 一种为限制性内切核酸酶（限制酶）,它切割某一特异的核苷酸序列； 另一种为独立的甲基化酶，它修饰同一识别序列。Ⅱ类中的限制性内切酶在分子克隆中得到了广泛应用，它们是重组DNA的基础。

Answer 2

DNA酶切产物再纯化后电泳，怎么看起来变长了
你做胶回收的那个柱子,只吸附DNA,就算有蛋白和其他杂质也在胶回收步骤中洗掉了,转化效率低一般不会是这个原因.
你先看看这些步骤有没有需要优化：
1.连接体系：粘末端是否匹配,载体与片段的比例、多少,Buffer,酶量,等等,可以参照连接酶的说明书.
2.转化体系：连接产物不要超过感受态量的10%,加入时不要吹打.
3.如果是自制的感受态,看一下转化效率,是否反复冻融,或者在室温放置较长时间.实验操作是否遵守流程等等.
4.确认一遍载体的抗性和培养基的抗性.