DNA酶切产物再纯化后电泳，怎么看起来变
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DNA酶切产物再纯化后电泳，怎么看起来变长了
你做胶回收的那个柱子,只吸附DNA,就算有蛋白和其他杂质也在胶回收步骤中洗掉了,转化效率低一般不会是这个原因.
你先看看这些步骤有没有需要优化：
1.连接体系：粘末端是否匹配,载体与片段的比例、多少,Buffer,酶量,等等,可以参照连接酶的说明书.
2.转化体系：连接产物不要超过感受态量的10%,加入时不要吹打.
3.如果是自制的感受态,看一下转化效率,是否反复冻融,或者在室温放置较长时间.实验操作是否遵守流程等等.
4.确认一遍载体的抗性和培养基的抗性.
你做胶回收的那个柱子,只吸附DNA,就算有蛋白和其他杂质也在胶回收步骤中洗掉了,转化效率低一般不会是这个原因.
你先看看这些步骤有没有需要优化：
1.连接体系：粘末端是否匹配,载体与片段的比例、多少,Buffer,酶量,等等,可以参照连接酶的说明书.
2.转化体系：连接产物不要超过感受态量的10%,加入时不要吹打.
3.如果是自制的感受态,看一下转化效率,是否反复冻融,或者在室温放置较长时间.实验操作是否遵守流程等等.
4.确认一遍载体的抗性和培养基的抗性.
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崔翠玲
2024-06-21 广告
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本回答由崔翠玲提供
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