Question

pcr产物第一次跑胶，有明显的一个条带。切胶回收后，将回收产物再次跑胶，却出现了两个明显分开的条带。

两次跑胶，条带都很清晰。
求合理解释和各种可能性原因。

Answer 1

应该是两条挨得很近的条带。
可能是pcr回收产物有杂带污染，跑pcr产物的时候没有分开，然后回收纯化以后，再跑就分开了。这个酶切之后跑电泳也是两条带。双酶切的话，没关系的，照样回收照样连，照样出结果。

追问

第二次跑胶，一个2800bp左右，一个1100bp左右。。所以让我很忧伤啊。。
第一次跑胶，条带在1100和2900之间偏大的位置。

两条DNA链能这么互相影响导致像一条杂交DNA一样么。。太神奇了。。

追答

你这个……(⊙_⊙?)
把目的条带位置的回收一下吧，不够用的，拿回收的再跑一下pcr
（回收下来的DNA应该是双链的，所以不会是两条链杂交，你看看样品的260/280，如果大大高于2才可能是解开的单链。）
当然你要求不高，可以直接往下做，反正之后还会胶回收的……

Answer 2

你切胶回收的时候，切胶台上有没有垫手套？照紫外的时候有没有垫手套？切胶的刀片洗了没？切胶试剂盒里的试剂有没有被污染？毕竟实验室都是公用的，很可能会污染别人做实验的DNA啊，这样跑出来就会有杂带