Question

求生物化学实验大神教一道题目！希望尽可能详细解答，知识点要准确。 1号试管:1ml卵清蛋白+1ml

求生物化学实验大神教一道题目！希望尽可能详细解答，知识点要准确。
1号试管:1ml卵清蛋白+1ml95％乙醇+1mlPH4.7产生沉淀，原因是什么？
2号试管:1ml卵清蛋白+1ml95％乙醇产生沉淀原因是什么？再加1ml的0.1mol/LNaOH,沉淀消失为什么？加1滴甲基红，溶液呈黄色，加1mol/L醋酸中和后沉淀出现呈红色，为什么？
本实验中甲基红作用是什么？

Answer 1

首先需要明确蛋白质沉淀、变性。
只有高浓度乙醇长时间作用才会使蛋白质变性,低浓度的乙醇会使蛋白质的亲水结构（氢键）破坏而沉淀析出,类似于盐析。发生沉淀的蛋白在合适的条件下会重新溶解（如溶于稀酸或稀碱），蛋白质仍有活性。
变性的蛋白质是不会再溶解了，因为变性即意味着结构的永久改变，蛋白失去活性了。

1.有机溶剂助沉法 + 等电点法沉淀蛋白.
1号试管内乙醇终浓度为32%，不能使蛋白变性，只能使蛋白沉淀，同时卵清蛋白的等电点pI是4.6-4.7，蛋白质在等电点时产生沉淀。

2.乙醇改变蛋白质的亲水结构导致沉淀，而加入0.1M NaOH后，使溶液pH远离蛋白质等电点（稀碱），在碱性条件下蛋白质重新溶解。
加入NaOH后溶液为碱性，故加入甲基红后为黄色；
加入1M 醋酸后（远高于0.1M的NaOH），使pH降低，醋酸/醋酸盐缓冲溶液的pH=pka =4.757,接近卵清蛋白的等电点，故蛋白会重新沉淀（等电点沉淀），此时溶液为酸性，故甲基红显示红色。甲基红是pH指示剂,变色范围是pH4.2(红)--6.2(黄)。