蛋白质纯度的测定方法有哪些?
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超速离心:既可以用来分离纯化蛋白质也可以用作测定蛋白质的分子量.
含量测定方法很多:
凯氏定氮:灵敏度低,适用于0.1.0mg氮,误差为 ±2%,干扰少,费时8小时
双缩脲法(Biuret法):灵敏度低1~20mg,中速20~30分钟
紫外吸收法:较为灵敏50~100mg,快速5~10分钟
Folin-酚试剂法(Lowry法):灵敏度高 5mg,40~60分钟,操作要严格计时;颜色深浅随不同蛋白质变化
考马斯亮蓝法(Bradford法):灵敏度最高1~5mg,15分钟,常用
分子量测定:
SDS-PAGE:还原SDS测定结果比较接IC-MS,价格适中,常用
高效凝胶过滤色谱:标准蛋白质和待测蛋白质形状一致时,准确高,差别越大越不准确
电喷雾离子化质谱:最准确
等电点测定:在不同pH条件下测量蛋白质的电泳迁移率,然后用迁移率对pH作图,对应于迁移率为零的pH就是蛋白质的等电点.
含量测定方法很多:
凯氏定氮:灵敏度低,适用于0.1.0mg氮,误差为 ±2%,干扰少,费时8小时
双缩脲法(Biuret法):灵敏度低1~20mg,中速20~30分钟
紫外吸收法:较为灵敏50~100mg,快速5~10分钟
Folin-酚试剂法(Lowry法):灵敏度高 5mg,40~60分钟,操作要严格计时;颜色深浅随不同蛋白质变化
考马斯亮蓝法(Bradford法):灵敏度最高1~5mg,15分钟,常用
分子量测定:
SDS-PAGE:还原SDS测定结果比较接IC-MS,价格适中,常用
高效凝胶过滤色谱:标准蛋白质和待测蛋白质形状一致时,准确高,差别越大越不准确
电喷雾离子化质谱:最准确
等电点测定:在不同pH条件下测量蛋白质的电泳迁移率,然后用迁移率对pH作图,对应于迁移率为零的pH就是蛋白质的等电点.
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