Question

获取目的基因的方法有哪些

Answer 1

获取目的基因的方法主要有基因组文库法、cDNA的克隆、反转录法、人工合成法等。

从基因文库中获取这个没什么就是现成的基因储存在受体菌上你用的时候提取出来就好了基因组文库法就是原教材中的用限制性内切酶直接获取。

cDNA文库法（即原教材中提到的逆转录法）。cDNA文库，是指汇集以某生物成熟mRNA为模板逆转录而成的cDNA序列的重组DNA群体。直接分离基因最常用的方法是“鸟枪法”，又叫“散弹射击法”。

人工合成主要是通过DNA自动合成仪，通过固相亚磷酸酰胺法合成，具体过程可以网上查询，反正是可以按照已知序列将核苷酸一个一个连接上去成为核苷酸序列，一般适于分子较小而不易获得的基因。对于大的基因一般是先用化学合成法合成引物，再利用引物获得目的基因。

目的基因简介：

目的基因(geneofinterest)，也称靶标基因，是指在实验中研究或操纵的特定基因。比如，转基因研究中转入到生物体内的外源的抗虫基因Bt或抗除草剂基因CP4-EPSPS等。

目的基因可以是生物体本身的，也可以是来自不同生物体的。比如Bt基因来自苏云金芽孢杆菌。

目的基因相关的操作包括目的基因鉴定、分离、克隆、转化及转化后鉴定和测试等。

当产生许多拷贝的目的基因后，可以通过酶切反应(或gataway系统)，将目的基因酶促连接到构建载体中，然后将整个构建在细菌中表达，从报告基因选取阳性转化体，通常涉及含有插入DNA的菌落中的一些颜色变化。挑取阳性菌落，做液体培养，提取质粒DNA，进行酶切，切胶纯合。获得的DNA可用于后续的转化。