Question

生物化学问题(高手或者老师进)

如何用实验证明在复制叉区域存在许多小片段的冈崎片段?
要在19号之前答复哦!麻烦大家了

Answer 1

DNA在复制时,由随从链所形成的一些子代DNA短链称为冈崎片段(Okazaki...⑵连接冈崎片段:在DNA连接酶的催化下,将冈崎片段连接起来,形成完整的DNA长链。...⑴自动终止:模板DNA链在接近转录终止点处存在相连的富含GC和AT的区域,使RNA转录...
有冈崎本人的实验方案可供参考：

1968年冈崎（Reiji Okazaki）设计了两组实验，其一是脉冲标记实验（pilse－labeling
experiment）。冈崎利用T4噬菌体侵染E.coli(t-)菌株，并分别用dTTP(3H-T)进行2’’，7’’,15’’,30’’,60’’,120’’的脉冲标记，分离提取T4噬菌体DNA，变性后，进行Cscl密度梯度离心，以检测具放射性的沉降片断，判断片断大小。结果表明经不同标记时间的，被3H-T标记的新合成的DNA片段几乎都为10-20s， 即均为1000-2000核苷酸大小。第二组实验是脉冲追踪实验（pulse－chase
experiment），为了研究在脉冲标记实验中所发现的10－20s的小片段在复制全过程中的发展结局，冈崎将实验菌株先进行同位素标记培养30秒，然后转入正常培养基继续培养数分钟，分离DNA进行密度梯度离心，发中∑�我驯涣�映晌?0－120S的大片段。为此将DNA的这种复制方式称为不连续复制模式，将最初合成的10－20s片段称为冈崎片段。

参考资料：http://hi.baidu.com/zhdyang88/blog/item/094fb7c2dbc6471b0ff477d0.html

Answer 2

楼上提出的设计引物PCR不科学，冈崎片段只存在于复制叉，大小随机，没有可供设计引物的序列信息，而且即使能够PCR也不能说明问题

有冈崎本人的实验方案可供参考：

1968年冈崎（Reiji Okazaki）设计了两组实验，其一是脉冲标记实验（pilse－labeling
experiment）。冈崎利用T4噬菌体侵染E.coli(t-)菌株，并分别用dTTP(3H-T)进行2’’，7’’,15’’,30’’,60’’,120’’的脉冲标记，分离提取T4噬菌体DNA，变性后，进行Cscl密度梯度离心，以检测具放射性的沉降片断，判断片断大小。结果表明经不同标记时间的，被3H-T标记的新合成的DNA片段几乎都为10-20s， 即均为1000-2000核苷酸大小。第二组实验是脉冲追踪实验（pulse－chase
experiment），为了研究在脉冲标记实验中所发现的10－20s的小片段在复制全过程中的发展结局，冈崎将实验菌株先进行同位素标记培养30秒，然后转入正常培养基继续培养数分钟，分离DNA进行密度梯度离心，发现小片段已被连接成为70－120S的大片段。为此将DNA的这种复制方式称为不连续复制模式，将最初合成的10－20s片段称为冈崎片段。

可能你会觉得他的试验太麻烦，确实，不过那时是1968年，呵呵。现在做的话只要将提取的T4DNA变性后上电泳，然后放射自显影就可以取代昂贵的氯化铯梯度离心了。其他方案我认为可以完全依照前人的做法，只限答题哦～～自己设计试验的话就不用T4了，缺点太多。

Answer 3

DNA在复制时,由随从链所形成的一些子代DNA短链称为冈崎片段(Okazaki...⑵连接冈崎片段:在DNA连接酶的催化下,将冈崎片段连接起来,形成完整的DNA长链

Answer 4

DNA在复制时,由随从链所形成的一些子代DNA短链称为冈崎片段(Okazaki...⑵连接冈崎片段:在DNA连接酶的催化下,将冈崎片段连接起来,形成完整的DNA长链。...⑴自动终止:模板DNA链在接近转录终止点处存在相连的富含GC和AT的区域,使RNA转录...

Answer 5

路过