Question

总糖和还原糖的测定

Answer 1

还原糖和总糖的测定 (3,5-二硝基水杨酸比色法) 是实验如下包含实验目的，原理，试剂，材料。

一、实验目的

1、掌握还原糖和总糖测定的基本原理。

2、学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光 度计的使用 。

二、实验原理 

还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。还原糖是 指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。

利用糖的溶解度 不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提 取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求 出样品中还原糖和总糖的含量(还原糖以葡萄糖含量计)。 

还原糖在碱性条件下加热可被氧化成糖酸及其它产物，而氧化剂3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计在540nm波长下测定光密度值。

查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以系数0.9 。 

三、实验材料和试剂

1、实验材料 ：面粉

2、实验试剂

① 1mg/ml葡萄糖标准液

② 3,5-二硝基水杨酸(DNS)试剂

③ 碘-碘化钾溶液：

④ 酚酞指示剂：

⑤ 6M HCl和6M NaOH 

四 、 实验器材

具塞玻璃刻度试管

50ml离心管

100ml烧杯

100ml三角瓶

100ml容量瓶

移液管：1ml；2ml；10ml

恒温水浴锅

离心机

天平

分光光度计