Question

常用的血清蛋白质含量测定方法有哪些

Answer 1

四种血清总蛋白质的测定的方法：

1.基于蛋白分子中含有酪氨酸和色氨酸而使用的酚试剂比色法 由于各种蛋白质分子中上述两种氨基酸的组成比例不同，特别是白蛋白含色氨酸为0.2%，而γ-球蛋白中含量达2%-3%，导致较大的差异。Lowry的改良法在酚试剂中加入Cu2+，集中原法和双缩脲反应两者的作用，使呈色灵敏度提高。其中75%的呈色依赖于Cu2+.反应产物最佳吸收峰在650-750nm，方法灵敏度为双缩脲方法的100倍左右。有利于检测较微量的蛋白质。但试剂反应仍易受多种化合物的干扰。

2.紫外测定法 采用280nm和215/225紫外吸收值，计算蛋白质含量280nm 是由于蛋白质分子中存在芳香族氨基酸所致。方法的特异性和准确性受蛋白分子中该种氨基酸的含量比例影响甚大。尿酸和肝红素在280nm附近有干扰。紫外区200-225nm是肽健的强吸收峰。在此区域其吸收值为280nm的10-30倍，将血清稀释1000-2000倍可以消除干扰物质的影响。

3.采用沉淀反应进行散射比浊法 用磺柳酸、三氯醋酸等配方，此方法甚为简便，不需特殊仪器，技术关键在于：①选择最佳试剂浓度及温度；②混匀技术；③选用的标准；④待测标本中的蛋白浓度。

4.染料结合法 蛋白质可与某些染料特异结合，如氨基黑（amino black）与考马亮蓝（comassive brilliant blue ）。这一性质除了可以用于电泳后的蛋白质区带染色，亦可用于总蛋白质的定量。缺点是多种蛋白质与染料的结合力不一致。考马亮蓝在与蛋白质结合后的吸收峰从465nm移向595nm，这一性质可用分光光度法来定量检测。

Answer 2

血清是血液中的一部分，去除了红细胞、白细胞、血小板和凝血因子后的液体部分。血清中包含大量的蛋白质，对于这些蛋白质的定量分析可以采用以下方法：
1.双硫酸盐法（BCA Protein Assay）：
这是一种受到广泛使用的、基于铜离子与蛋白质结合后在双硫酸盐存在下产生紫色产物的方法。吸光度与蛋白质浓度呈线性关系。
2.Lowry方法：
这是一种老式的、经典的蛋白质测定方法，也是基于铜与蛋白质结合后在Folin-Ciocalteu试剂存在下产生的颜色变化。
3.Bradford蛋白质测定法：
该方法基于Coomassie蓝G-250与蛋白质之间的结合。这种结合导致染料从红棕色转变为蓝色，吸光度的增加与蛋白质浓度呈线性关系。
4.UV吸收法：
蛋白质可以在280nm处吸收紫外光，这主要是因为其中的芳香族氨基酸如酪氨酸和色氨酸。使用这种方法时，需要确保样品中没有其他吸收280nm光的物质。
5.免疫测定法：
例如ELISA或其他免疫学方法，可以用于血清中特定蛋白质（如肌酸激酶、转铁蛋白等）的测定。
6.电泳方法：
如血清蛋白电泳或SDS-PAGE，可以用于分析血清蛋白质的组成和相对丰度，但通常需要与其他定量方法结合使用。
7.质谱分析：
尽管这是一种更高级和复杂的技术，但它提供了对血清蛋白质深入分析的可能性，特别是在蛋白质组学的研究中。
选择哪种方法取决于实验的目的、所需的准确性、灵敏度、样品处理和分析的时间，以及实验室的设备和经验。对于大多数常规的血清蛋白质测定，BCA、Lowry和Bradford方法都是经济且有效的选择。